基于Fosmid文库和PCR筛选技术的蜘蛛包卵丝蛋白基因克隆及分析

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基于Fosmid文库和PCR筛选技术的蜘蛛包卵丝蛋白基因克隆及分析

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毕业论文范文题目：基于Fosmid文库和PCR筛选技术的蜘蛛包卵丝蛋白基因克隆及分析，论文范文关键词：基于Fosmid文库和PCR筛选技术的蜘蛛包卵丝蛋白基因克隆及分析
基于Fosmid文库和PCR筛选技术的蜘蛛包卵丝蛋白基因克隆及分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：蜘蛛丝具有多样的分子结构及生物生态学功能,同时还具有强度高、弹性好、初始模量大、断裂能大、可生物降解、生物相容性好、保湿性好、轻盈等其它合成高性能纤维所无法比拟的优良机械性能及特性,因而,在纺织、航天航空、生物医学以及军事等领域具有广泛的潜在应用前景。然而,蜘蛛具有种内残食性且蛛丝产量较低,因而,采用大规模饲养蜘蛛以获取蛛丝的方法是不可取的,目前以基因工程的方法获取蛛丝蛋白是首选策略。研究表明包卵丝的韧性极其优越,（略..）因此,本实验通过构建大腹园蛛基因组Fosmid文库以钓取包卵丝蛋白全长编码基因,从而为后续仿生蛛丝的研究奠定基础。包卵丝蛋白主要分为葡萄状丝蛋白和管状腺丝蛋白,本实验主要围绕这两种蛋白开展研究：1.成功分离葡萄状腺体及管状腺体并获取其高质量总RNA,并通过巢式PCR技术获取悦目金蛛葡萄状腺丝和管状腺丝部分cDNA序列,并对其的分子机制进行了探索与讨论,初步阐释了包卵丝蛋白的结构模式和进化演变,为包卵丝全长基因的克隆及（此处忽略..）仿生研究提供了前期研究基础；2.通过3'-RACE的方法成功获取大腹园蛛葡萄状丝CTR序列及两个完整的重复单元,为AcSp1编码基因的结构解析提供了参考,并为进一步研究蛛丝蛋白基因结构特点及人工仿生蜘蛛丝奠定了理论基础；3.建立了适于提取大腹园蛛HMW-gDNA的方法—改进的CTAB法,并在此基础上,成功构建了无偏向性的A.ventricosusFosmid基因组文库,对30-40Kb的外源片段经过补平磷酸化、连入pCC2FOSTM（略..）载体、lambda噬菌体包装蛋白进行体外包装、转染EPI300TM-T1RE.coli,成功共构建了A.ventricosusFosmid基因组文库。5次包装滴定度处于6.0×104-1.1×105之间,共产生约2.99×105个文库克隆,覆盖A.ventricosus全基因组约5倍；4.建立了基因组文库的PCR逐级筛选系统：该方法基于384-wellplate构建Fosmid基因组文库的板混合池、行混合池和列混合池,利用特异性引物对混合池进行筛选以确定阳性克隆的精（本文此处忽略..）确位置,该方法既保留了常规PCR文库筛选方法的简捷经济的特点,又弥补了筛选周期长、工作量大等缺点。通过本实验研究,成功获取了悦目金蛛(Argiopeamoena)和大腹园蛛(Araneusventricosus)包卵丝蛋白编码基因,并成功构建了大腹园蛛基因组Fosmid文库并建立适于基因组文库的PCR逐级筛选系统,为后续的筛选工作奠定了基础。

以上为本篇毕业论文范文基于Fosmid文库和PCR筛选技术的蜘蛛包卵丝蛋白基因克隆及分析的介绍部分。

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