核糖核酸酶抑制因子的抗体制备与纯化及ELISA法对其药代动力学的

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核糖核酸酶抑制因子的抗体制备与纯化及ELISA法对其药代动力学的

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毕业论文范文题目：核糖核酸酶抑制因子的抗体制备与纯化及ELISA法对其药代动力学的，论文范文关键词：核糖核酸酶抑制因子的抗体制备与纯化及ELISA法对其药代动力学的
核糖核酸酶抑制因子的抗体制备与纯化及ELISA法对其药代动力学的毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：肿瘤是威胁人类健康的主要疾病之一。传统的化疗药物主要从直接杀伤肿瘤细胞入手，同时对正常细胞亦有毒副作用。核糖核酸酶抑制因子(RibonucleaseInhibitot，RI)抑制肿瘤的作用则是通过与血管生成因子(Angiogenin，Ang)紧密结合，抑制肿瘤血管的生成，阻断肿瘤细胞的氧气及营养供应，从而使肿瘤细胞停止生长，而对正常细胞却无毒副作用。我们实验室对RI的抗肿瘤研究进行了大量工作，实验表明，从人胎盘和猪肝中提取的RI，可以抑制乳腺癌实体瘤Ca761，肉瘤S180，肝癌实体瘤H22的生长。因此将其作为抗肿瘤药物开发利用无疑为肿瘤（本文此处忽略..）治疗提供了一种新思路。国内外有关RI的研究多集中在结构方面，对其功能尤其是将RI作为抗肿瘤药物的研究报道较少。本实验室已报告RI具有良好的治疗多种肿瘤疗效；本研究在已有的基础上成功制备了RI抗体并进行纯化，应用ELISA法对RI的药代动力学进行了初步探索。RI是哺乳动物细胞浆中的一种酸性糖蛋白，分子量约为50kD，取RI200μg/只动物，加等体积的福氏不完全佐剂充分乳化后免疫家兔，经检测当抗血清效价达到5000以上时采血。通过SDS-PAGE分析，在约55kD处有清晰条带，为RI的抗体免疫球蛋白TgG。RecombinantProte（文章此处忽略..）in(rProtein)ASepharoseFastFlow是一种亲和性介质，重组蛋白A与SepharoseFastFlow偶联后，增强了特异性结合IgGFc段的能力，这种共价结合使抗血清中的免疫球蛋白IgG得到高度纯化。为了进一步提高纯化效率，本文对实验条件进行筛选优化，确定了上样量为2ml，洗脱液梯度浓度最高为30％，经吸光度及蛋白含量测定确定组分收集为9～16管(1ml/管)。纯化后的抗体IgG进行SDS-PAGE，在约55kD处有单一条带，经western-blot检测有特异性条带出现(约50kD处)，说明纯化效果较好。ELISA法测其效价（文章此处忽略..），滴度达64，000以上，活性保持得很好，其稳定性可达12个月以上。随着生化技术的迅速发展，蛋白药物的开发日益受到重视，但其生理活性强，用药剂量小，致使体液中药物浓度很低，要求检测方法必须具有极高的灵敏度。故本实验选用了检测可达pg~ng/m1级水平的EL工SA法。实验中采用间接EL工sA法测抗原，建立了标准曲线，并对测定条件进行优化，确定了一抗稀释度为1:4000，二抗稀释度为l:2000，BSA封闭液浓度为2%。同时对其方法学进行考证，灵敏度可达0.05pg/m1，批内变异系数为9.28%，批间变异系数为13.56%，一抗稀释4000倍后，稳定性可达6个月以上。目前国内外尚无RI抗体（本文此处忽略..）出售，本实验制备及纯化的RI抗体除了可用于Western一blot检测外，还极有希望成为肿瘤的早期诊断的一个新指标(本实验室已通过实验证明恶性肿瘤患者红细胞中RI活性下降，瘤组织内RI基因表达下降)。R1作为抗肿瘤药物其药代动力学研究未见报道，本文对EL工SA法进行了初步探讨，为以后的测定方法提供了一定的实验基础，进而为RI的药代动力学深入研究打下了良好的基础。

以上为本篇毕业论文范文核糖核酸酶抑制因子的抗体制备与纯化及ELISA法对其药代动力学的的介绍部分。

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