恩诺沙星在异育银鲫肝微粒体中代谢及对P450主要亚酶影响的初步研

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恩诺沙星在异育银鲫肝微粒体中代谢及对P450主要亚酶影响的初步研

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毕业论文范文题目：恩诺沙星在异育银鲫肝微粒体中代谢及对P450主要亚酶影响的初步研，论文范文关键词：恩诺沙星在异育银鲫肝微粒体中代谢及对P450主要亚酶影响的初步研
恩诺沙星在异育银鲫肝微粒体中代谢及对P450主要亚酶影响的初步研毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：细胞色素P450酶系(CytochromeP450,简称CYP或者P450)是参与药物代谢最主要的一组同工酶。P450介导了药物在生物体内的代谢过程,而药物可能对参与其代谢的P450相关酶活产生诱导或抑制作用。本试验选取我国普遍养殖的淡水品种异育银鲫(Carasiumauratusgibelio)为研究对象,以第三代氟喹诺酮类药物恩诺沙星(Eofloxacin)为主要研究药物,考察恩诺沙星在其肝微粒体的代谢情况及对主要P450亚型酶活影响进行初步研究。以期为该类药物对鱼类P450的进一步深入研究,指导临床合理应用提供理论基础。应用差速离心法提取银鲫微粒体,以CO还原差示光谱法测定肝、肾、鳃、肠、肌肉微粒体的细胞色素P450及b5含量。结果显示,细胞色素P450及b5含量均以肝微粒体最高,其P450及b5含量分别为0.312±0.008nmol/mg,0.142±0.010nmol/mg,其次为肾、鳃、肠微粒体,肌肉最低,其P450及b5含量分别为0.008±0.032nmol/mg,0.0015±0.033nmol/mg。用紫外分光光度法测定CYP2B型氨基比林N-脱甲基酶(Ami（文章此处忽略..）nopyrineN-demethylase,APD)、CYP3A型红霉素N-脱甲基酶(ErythromycinN-demethylase,ERND)及CYP2E型苯胺-4-羟化酶(4-aniline-hydroxylase,AH)活性。APD及ERND活性在上述组织中分布差异性类似,均表现为肝微粒体中最高,分别为1.668±0.104nmol/min/mg和0.941±0.061nmol/min/mg,其次为肾、鳃、肠微粒体,肌肉微粒体中最低,两者活性分别为0.245±0.011nmol/min/mg和0.078±0.019nmol/min/mg;AH活性以肝微粒体最高,为0.052±0.009nmol/min/mg,其次为鳃微粒体,为0.044±0.007nmol/min/mg,肌肉微粒体不能检出。以7-乙氧基异吩噁唑酮-O-脱乙基酶(7-ethoxyresorufin-O-deethylase,EROD)活性及7-乙氧基香豆素-O-脱乙基酶(7-ethoxycoumarin-O-deethylase,ECOD)活性反映CYP1A的活性,用荧光分光光度法测（文章此处忽略..）定两者活性在肝微粒体中最高,分别为0.064±0.008nmol/min/mg和0.037±0.006nmol/min/mg,其次为肾和鳃微粒体,肠微粒体含量最低,而肌肉微粒体不能检出。提示银鲫主要组织微粒体具有上述P450亚型活性,且它们在银鲫体内的分布和活性存在组织和器官差异性,各酶活性均以肝微粒体中含量最高。采用电喷雾离子阱质谱法在正离子检测方式下,对异育银鲫口灌恩诺沙星给药后血淋巴中的恩诺沙星和其代谢产物进行定性分析。对其中恩诺沙星及代谢产物的质谱裂解行为进行碰撞诱导解离分析,结果表明恩诺沙星在异育银鲫体内的代谢反应以脱乙基反应为主,还有羟基化反应。应用RP-HPLC法检测其主要代谢产物环丙沙星(Ciprofloxacin,CF),以间接反映恩诺沙星N-脱乙基酶的活性。结果显示,采用二氯甲烷提取、正已烷去脂提取有效成分,样品回收率均大于81.4%,含CF或EF的肝微粒体样品能在4℃下稳定至少72h,日内变异系数不超过3.51%,日间变异系数不超过3.71%,EF和CF准确度分别小于8.1%、6.5%,检（文章此处忽略..）测限(信超比为3)分别为0.15μmol/L、0.3μmol/L。EF在银鲫肝微粒体中代谢符合一级消除方程C=140e~(-0.0721),消除速率常数(K)为0.072/h,消除半衰期(T_(1╱2))为9.627h。用OriginLab软件的Hyperbl模型进行拟合,以方程y=P_1·x/(P_2+x)表示米氏常数V_(max)、K_m两者的关系,求得V_(max)为0.2602±0.0147nmol/(mg·min),K_m为53.8985±10.2257μmol/L,内在清除率(C_(lint))约为0.0048mL/min·mg。据此,推测EF-N-脱乙基酶与底物结合力不强,酶促反应强度处于中等水平,EF在银鲫肝微粒体中的代谢较缓慢。分别采用腹腔注射单次给药3mg╱kg、3mg╱kg连续给药三天及30mg╱kg连续给药三天,30mg╱kg口灌给药三天,各组均于末次给药24h后对银鲫肝微粒体上述五个主要药酶进行活性测定,并对各试验组进行组间差异性比较分析。结果表明腹腔注射给药组的恩诺沙星对银鲫鱼肝微粒体主要酶活的抑制具有不同程度的剂量-时间效应,而口灌组恩诺沙星对银鲫肝微粒体酶活抑（略..）制强度均普遍高于腹腔注射给药组。体外实验表明10μM恩诺沙星均能不同程度抑制APD、ERND、EROD、ECOD及AH活性,特别是对依赖于3A亚型的ERND抑制效果最为显著,抑制率达到0.40左右,AH酶受抑制最小。提示EF对银鲫肝微粒体上述主要药酶具有广泛的抑制作用,水产养殖临床应用此药需慎重。

以上为本篇毕业论文范文恩诺沙星在异育银鲫肝微粒体中代谢及对P450主要亚酶影响的初步研的介绍部分。

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