动物性食品源金黄色葡萄球菌的耐药分析及blaZ、mecA和nuc基因的

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动物性食品源金黄色葡萄球菌的耐药分析及blaZ、mecA和nuc基因的

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毕业论文范文题目：动物性食品源金黄色葡萄球菌的耐药分析及blaZ、mecA和nuc基因的，论文范文关键词：动物性食品源金黄色葡萄球菌的耐药分析及blaZ、mecA和nuc基因的
动物性食品源金黄色葡萄球菌的耐药分析及blaZ、mecA和nuc基因的毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：近年“食品中耐药细菌的危险性”引起重视,关于食源致病菌的耐药性的研究增多,有研究表明产肠毒素和具有抗药性的金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,简称SA)已在食品中广泛存在,尤其养殖业中大量使用抗生素,动物性食品极易成为耐药细菌的“蓄水池”。因此本实验从四川省7个地方采集了猪肉、牛奶、牛肉、鸡肉和鸡蛋等动物性食品样品,以分析其中SA的污染情况,调查四川动物性食品源SA的耐药性,并建立多重PCR方法快速检测SA对β-内酰胺类抗生素的耐药基因,侧重检测耐甲氧西林的SA(MRSA)。1.动物性食品源SA的分离鉴定自2006年12月至2007年9月共采集样品2560份,参照GB和《葡萄球菌属细菌生化鉴定编码(TH-16S)》,利用选择性培养基和生化实验等常规方法对SA进行了分离鉴定。用Baird-Parker平板初步筛选分纯获得疑似菌株118株,根据科玛嘉SA显色平板菌落特征,涂片染色镜检,溶血现象和血浆凝固酶等实验结果,依GB判定其中108株为SA,依据TH-16S中葡萄球菌双（文章此处忽略..）歧索引判定,凝固酶阳性的113株均为SA,而依据16项生化实验结果仅有76株菌株鉴定为SA。从污染情况来看,生牛奶中的分离率最高(10.54%),其次是猪肉(7.11%)、鸡肉(4.12%),蛋样中SA的分离率很低。四川地区动物性食品源SA的生化表型复杂且存在一定差异,常规的表型分析具有一定缺陷。各个地方各类样品中SA污染情况有一定差异,与其它报道相比,四川省生肉、生奶和鲜蛋中SA的分离率较低。2.动物性食品源SA的耐药性分析采用美国临床实验标准委员会(NCCLS)推荐的肉汤微量稀释法,对凝固酶阳性的113株SA进行了25种临床常用抗生素(组合)的敏感性实验。结果:SA对青霉素G(93.81%)、氨苄西林(92.92%)、甲氧苄啶(92.92%)和磺胺异噁唑(88.5%)的耐药率很高,对林可霉素、红霉素、阿奇霉素和四环素耐药率在41.59%～47.79%;对庆大霉素、卡那霉素、替米考星的耐药率在21.24%～29.20%;对氯霉素、达氟沙星和环丙沙星耐药率较低(2.65%～7.08%);所有菌株均对苯唑西林,头孢类(先锋唑啉、头孢曲松、头孢噻呋),阿米卡星,强力霉素,喹诺酮类(恩诺沙星、洛美沙星、诺氟沙星)敏感;共产（文章此处忽略..）生了47种耐药谱;SA可耐受药物的种数最少2种;主要对青霉素类、磺胺类和大环内酯类表现出多重耐药。四川省动物性食品源SA耐药情况与其它地区的差异不明显,没有检测出MRSA。研究结果可以作为兽医用药的参考,也为食品源SA耐药性的安全评价提供了依据。另外,113株凝固酶阳性SA中49.56%的菌株表现出β-内酰胺酶活性。对68株多重耐药的菌株进行了苯唑西林(OXA)梯度浓度药物诱导,当药物浓度达5μg/mL时,获得8株耐药菌SCI1～SCI8。用含有6μg/mLOXA的4%NaCl的M-H平板进行检测,结果获得了3株疑似MRSA,分别是SCI3、SCI6和SCI8,有待通过基因分析验证。3.PCR方法的建立与应用根据在GenBank中注册的SA的耐热核酸酶基因nuc,β-内酰胺酶基因blaZ和甲氧西林耐药基因mecA,利用Primer5设计了3对特异性引物,通过实验条件的优化成功建立了分析SA耐β-内酰胺类抗生素的耐药性的三重PCR方法,可以在一次PCR反应中扩增出相应的229bp(nuc)、787bp（文章此处忽略..）(blaZ)和1459bp(mecA)的目的片段。应用这套多重PCR方法对从样品中分离的79株菌株进行了检测。结果:97.47%的菌株nuc阳性,73.42%的blaZ阳性,均无mecA检出;与常规的包括耐热核酸酶和凝固酶在内的鉴定方法的符合率达97.47%,与生化鉴定的符合率为75.95%;blaZ扩增结果与β-内酰胺酶实验和对青霉素类的敏感性分析结果的符合率分别为62.34%和77.92%,三结果同时符合的比率为50.65%。多重PCR分析结果为今后食源SA的鉴定和耐药性快速分析提供了参考。对8株经过OXA诱导的菌株(SCI1～SCI8)进行了多重PCR检测。原始株SCI6nuc+、blaZ+、mecA-,而8、10、12、16μg/mLOXA诱导后的菌株SCI6-8、SCI6-10、SCI6-12、SCI6-16均nuc-、blaZ-、mecA+,诱导株可能通过OXA诱导获得了耐药基因mecA,为进一步研究食源SAmecA基因的获得和MRSA的遗传背景提供了很好的材料,诱导株nuc和blaZ的“缺失”或“变异”和mecA的来源还有待进一步研究证实。其它7株菌（此处忽略..）诱导前后扩增结果相同。对标准菌ATCC33591的nuc、blaZ、mecAPCR产物和SCI6-8的mecAPCR产物进行了克隆及序列测定,片断大小均与软件设计的相应片断大小一致。对基因序列和相应氨基酸序列比对分析表明同源性很高。将测定的序列在GenBank中注册,序列号分别为:FJ809757、FJ809758、FJ810876和FJ810877。

以上为本篇毕业论文范文动物性食品源金黄色葡萄球菌的耐药分析及blaZ、mecA和nuc基因的的介绍部分。

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