农杆菌介导核盘菌菌丝转化体系的建立及SsDRV下调基因Ss-CYP1的功

搜索高级搜索

原创毕业论文

农杆菌介导核盘菌菌丝转化体系的建立及SsDRV下调基因Ss-CYP1的功

作者: 浏览:3次

免费专业论文
政治工作论文
计算机论文
营销专业论文
工程管理论文范文
医药医学论文范文
法律论文范文
生物专业论文
物理教学论文范文
人力资源论文范文
化学教学论文范文
电子专业论文范文
历史专业论文
电气工程论文
社会学专业论文
英语专业论文
行政管理论文范文
语文专业论文
电子商务论文范文
焊工钳工技师论文
社科文学论文
教育论文范文
数学论文范文
物流论文范文
建筑专业论文
食品专业论文
财务管理论文范文
工商管理论文范文
会计专业论文范文
专业论文格式
化工材料专业论文
英语教学专业论文
电子通信论文范文
旅游管理论文范文
环境科学专业论文
经济论文
人力资源论文范文
营销专业论文范文
财务管理论文范文
物流论文范文
财务会计论文范文
数学教育论文范文
数学与应用数学论文
电子商务论文范文
法律专业论文范文
工商管理论文范文
汉语言文学论文
计算机专业论文
环境艺术专业论文
信息计算科学专业
物流专业论文范文
人力资源论文范文
教育管理论文范文
现代教育技术论文
小学教育论文范文
机械模具专业论文
报告,总结,申请书
理工科专业论文
心理学论文范文
学前教育论文范文

毕业论文范文题目：农杆菌介导核盘菌菌丝转化体系的建立及SsDRV下调基因Ss-CYP1的功，论文范文关键词：农杆菌介导核盘菌菌丝转化体系的建立及SsDRV下调基因Ss-CYP1的功
农杆菌介导核盘菌菌丝转化体系的建立及SsDRV下调基因Ss-CYP1的功毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：核盘菌[Sclerotiniasclerotiorum(Lib.)deBary]是一种世界性分布的植物病原真菌，可以在植物的多个生育期产生危害，引起茎腐病、猝倒病、颈腐病、花期枯萎病和菌核病等。其寄主广泛，菌核存活能力强，难以防治，目前主要通过化学药剂控制该病害。2006年，核盘菌的全基因组序列公布，为该菌的致病机理研究提供了有利条件。可是目前关于核盘菌的分子生物学研究较少，主要是受其转化方法的限制。至今已有PEG介导原生质体和农杆菌介导子囊孢子对核盘菌实行遗传转化，然而这些方法转化周期长、操作繁琐。针对这些问题，本课题研究了农杆菌介导核盘菌菌丝的转化体系并以此为基础对核盘菌毒力衰退相关病毒(SsDRV)下调基因Ss-CYP1的功能进行了初步探索，结果如下：以植物转化载体pCAMBIA（文章此处忽略..）3300为基础，在SacⅠ和XhoⅠ位点连入潮霉素磷酸转移酶基因(PtrpC-HPH-TtrpC)，构建得到T-DNA随机插入载体pTFSS，并将载体pTFSS导入到农杆菌菌株EHA105中。在AS存在的条件下，把农杆菌与核盘菌的菌丝碎片在20-22℃共培养。3天后，用30μg／ml潮霉素和500μg／ml的头孢霉素对共培养物进行选择性培养，结果成功得到了待定转化子。用HPH特异引物对待定转化子进行PCR鉴定，在所有待定转化子的基因组DNA中均扩增出期望片段，而在潮霉素选择性PDA培养基上不能生长的菌株中则不能扩增出期望的片段。随机挑选扩增片段测序，结果表明扩增片段均为潮霉素磷酸转移酶基因。表型上抗潮霉素的待定转化子其基因组DNA与来自HPH的探针进行点杂交具明显杂交信号，而非转化子则没有杂交信号。这些结（本文此处忽略..）果表明农杆菌介导可以成功转化核盘菌的菌丝。转化子在PDA上连续培养90d后，仍能在抗性平板上正常生长；并且通过t-检验分析，连续培养60d后的菌株在生长速度上与出发菌株没有显著性差异。转化子的菌核在PDA上经6次连续的“萌发—菌核—萌发”培养后形成的菌丝也能在抗性平板上稳定生长。这些结果表明由菌丝得到的转化子在无性生长阶段的遗传上是稳定的。转化子的生物学特性研究表明，转化子在潮霉素浓度为150μg／ml的抗性平板上能正常生长；一部分转化子在生长速度、致病力、形态特征和产菌核等方面与野生型菌株出现了差异。本研究还以菌丝块和菌核为受体进行了转化，发现以菌丝块为受体也能转化成功。以经过哈茨木霉裂解酶酶解后的菌丝为受体，可以克服核盘菌菌丝转化的不稳定性。对影响该体系转化效果的因素分析发现，在（本文此处忽略..）共培养之前农杆菌用1.2M山梨醇悬浮和菌丝捣碎后用1.2M山梨醇恢复培养都能提高转化效率。同时，菌丝捣碎时间30sec和菌丝恢复培养2h可以使转化得到较好的效果。对Ss-CYP1基因的生物信息学分析表明，该基因的DNA序列含有3个外显子和2个内含子，编码含有208个氨基酸的蛋白。经Xblastx分析发现核盘菌的全基因组中有10个基因片段与Ss-CYP1有同源性；进一步预测表明，这其中有8个基因属于Cyclophilin基因家族。实验室前期研究发现Ss-CYP1基因在核盘菌弱毒菌株Ep-1PN中的表达受抑制。为了研究该基因在核盘菌生长、发育和致病等过程中的作用，以植物转化载体pCAMBIA3300为基础，分别构建了Ss-CYP1基因沉默载体pSILENCE、Ss-CYP1基因超量表达载体pCYO和Ss-CYP1基因反向表（文章此处忽略..）达载体pCYS。利用农杆菌介导转化核盘菌菌丝的方法，成功地得到了12个Ss-CYP1基因沉默转化子、9个Ss-CYP1基因超量表达转化子和16个Ss-CYP1基因反向表达转化子。通过对这些转化子的生物学特性的研究表明，75％的Ss-CYP1基因反向表达转化子在致病力和生长速度上和对照没有显著性的差异，然而55％的Ss-CYP1基因超量表达转化子的致病力比对照增强，25％的Ss-CYP1基因沉默转化子的致病力比对照减弱。这些结果可以初步说明Ss-CYP1基因可能和核盘菌的致病力相关，进一步的验证需要通过Southern和Northern杂交证实。

以上为本篇毕业论文范文农杆菌介导核盘菌菌丝转化体系的建立及SsDRV下调基因Ss-CYP1的功的介绍部分。

本论文在医药医学论文栏目，由论文网(www.zjwd.net)整理,更多论文,请点论文范文查找

收费专业论文
汉语言文学论文
物理学论文
自动化专业论文
测控技术专业论文
历史学专业论文
机械模具专业论文
金融专业论文
电子通信专业论文
材料科学专业论文
英语专业论文
会计专业论文
行政管理专业论文
财务管理专业论文
电子商务国贸专业
法律专业论文
教育技术学专业论文
物流专业论文
人力资源专业论文
生物工程专业论文
市场营销专业论文
土木工程专业论文
化学工程专业论文
文化产业管理论文
工商管理专业论文
护理专业论文
数学教育专业论文
数学与应用数学专业
心理学专业论文
信息管理专业论文
工程管理专业论文
工业工程专业论文
制药工程专业论文
电子机电信息论文
现代教育技术专业
新闻专业论文
热能与动力设计论文
教育管理专业论文
日语专业论文
德语专业论文
轻化工程专业论文
社会工作专业论文
乡镇企业管理
给水排水专业
服装设计专业论文
电视制片管理专业
旅游管理专业论文
物业管理专业论文
信息管理专业论文
包装工程专业论文
印刷工程专业论文
动画专业论文
营销专业论文范文
工商管理论文范文
汉语言文学论文范文
法律专业论文范文
教育管理论文范文
小学教育论文范文
学前教育论文范文
财务会计论文范文

电子商务论文范文

上一篇：重组抗菌肽Fowlicidin-1的制备及..

下一篇：新型培养料“土可乐”6号对双孢蘑..