血清蛋白质标记物检测在小儿肾母细胞瘤预后监测中的利用

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血清蛋白质标记物检测在小儿肾母细胞瘤预后监测中的利用

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毕业论文范文题目：血清蛋白质标记物检测在小儿肾母细胞瘤预后监测中的利用，论文范文关键词：血清蛋白质标记物检测在小儿肾母细胞瘤预后监测中的利用
血清蛋白质标记物检测在小儿肾母细胞瘤预后监测中的利用毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究背景肾母细胞瘤(nephroblastoma)是小儿外科常见的恶性、本质性肿瘤。预后好于其它肿瘤。自90年代以来，肿瘤手术切除率近于100％，5年生存率达到80％，早期诊断并行手术切除可明显进步患儿长期生存率。术后复发是影响生存率的重要因素。实际已证明，很多术后复发、转移的肾母细胞瘤患儿，假如可能及早发明，及时医治，部分病例可达到临床治愈、长期存活的疗效。故对小儿恶性实体瘤的术后随访非常重要，这对早发明肿瘤的复发转移、及时医治、进步生存率有重要意思。目前对其术后监测重要依附临床症状跟超声检查、CT、泌尿系平片、静脉肾盂造影等影像学手段，但这些检查手段只有当肿瘤长到必定大小时才干被发明，敏感性差。此外，当前尚未发明肾母细胞瘤诊断特异性强的生物学标记物。因此，摸索一种简单、疾速、敏感性高跟特异性强的肾母细胞瘤预后监测的新方法存在重要的临床意思。肾母细胞瘤的产生是多基因多阶段多因素的能源学过程，是癌基因激活跟抑癌基因失活的成果，波及到多个基因，基因渐变或调控异样时，细胞内的蛋白质在成份跟数量上都会有相应的改变，通过对蛋白质的动态察看可能懂得肿瘤是否复发或转移的动态变更。蛋白质组学的发展为肿瘤预后监测提供了新的思维跟技巧平台。名义加强激光解吸电离化飞翔时光质谱(SurfaceEnhancedLaserDesorption／IonizayionTimeofFlight-MassSpectrometry，SELDI-TOF-MS)技巧是近年开发的新型蛋白（文章此处忽略..）组学技巧，利用基因芯片的设计原理，把层析、质谱等技巧公道地与蛋白质芯片结合，可检测出传统方法难以鉴定的蛋白质跟多肽，是发明蛋白质标记物的幻想方法，存在疾速、灵敏、高通量等特点。咱们利用SELDI-TOF-MS技巧检测肾母细胞瘤患儿术前术后血清蛋白质标记物的表白差别，摸索肾母细胞瘤患儿预后监测的新方法。研究目标检测肾母细胞瘤患儿术前术后血清蛋白质标记物的表白差别，摸索肾母细胞瘤患儿预后监测的新方法。材料与方法1．临床材料血清标本100例均来自郑州大学第一从属病院小儿外科，其中肾母细胞瘤术前标本30例、术后2周24例(行根治术21例，行姑息切除术3例)、术后3个月跟6个月各23例。30例肾母细胞瘤标本均经2位以上病理学医师证明。其中男16例，女14例。年纪24天～10岁，均匀2.8±0.1岁；术前术后对比研究的24例患儿中男13例，女11例，均匀年纪2.6±0.1岁，术前均未接收放化疗。门诊体检的健康小儿20例作为畸形对比组。与患儿年纪性别相配对。外周静脉血标本均于凌晨空腹时抽取，静置1h后3000rpm离心10min，收集血清样本，分装储存于-80℃保存。2．重要试剂跟仪器CHAPS缓冲液，尿素，DTT，醋酸钠缓冲液，SPA(Sinapinicacid)均购自美国Sigma公司。蛋白芯片生物体系(CiphergenPBSⅡ~+SELDI-TOF-MS)跟弱阳离子交换芯片WCX2均购自美国CiphergenBiosystems公司。3．实验步骤血清标本冰浴解冻，4℃离心；取96孔板置冰盒上，每孔加U9(9MUrea，2％CHAPS，1％DTT)10ul，血清5ul，4℃层（略..）析柜600r／min振荡30min。震动结束前15min做芯片预处理，芯片装入Bioprocessor中，记录芯片号；每孔加醋酸钠(100mmol／L，pH4)200ul，层析；U9处理后的96孔板置冰上，排枪加醋酸钠185ul，层析；取已处理的样本100ul参加到芯片上，层析，甩去残液，疾速拍干。加醋酸钠200ul，振荡，甩掉，拍干。200ul去离子水200ul冲刷、甩干。芯片风干后，每孔分两次参加50％饱跟SPA1ul，干燥后上机待测。4．数据收集与处理用已知分子量的蛋白芯片将SELDI-TOF-MS体系校订到分子量误差＜0.1％。将结合好蛋白质的WCX2蛋白质芯片用质谱浏览仪分析。分析参数：激光强度为170，灵敏度为6，每个样本收集总点数140次。收集数据范畴1000～30000，优化范畴2000～20000。以质控血清作反复性检测，其峰值大小跟强度变异系数为0.05％跟19.7％。数据用ProteinchipSoftware3.1校订。ZUCI-ProteinChipDataAnalyzeSystem软件包分析，离散小波分析去除噪音，减掉基线。用部分极值的方法找出样本各自的峰，并过滤掉信噪比小于2的峰。以10％为最小阈值做聚类分析，将各个样本中m／z的差别小于0.3％的峰聚为一类。支撑向量机分类器设置：采取径向基核函数，Gamma值设为0.6，罚分函数(C)设为19。特点向量的抉择采取统计过滤结合模型依附性筛选方法，树破断定模型，用留一法穿插验证评估模型的断定后果。采取断定分析方法处理质谱数据对经S处理得到的成果进行验证。5．统计学处理质谱原始数据经过滤噪音，聚类分析处理后，对初步筛（本文此处忽略..）选出的质荷比峰数据做Wilconxon秩跟测验，并分辨对患儿术前与畸形对比组、手术前后、术后与畸形对比组的质谱数据进行t测验。测验标准取α=0.01。成果1．肾母细胞瘤患儿与畸形对比组比较30例术前标本跟畸形对比组标本的质谱数据经初步过滤筛选得到352个m／z峰，对其绝对强度做Wilconxon秩跟测验分析，P值＜0.01的m／z峰11个，从差别明显蛋白质峰的任意组合中，采取SVM筛选出猜测值的youden指数(阳性率与阴性率之差)最高的组合模型，筛出m／z峰值位于6984.5跟6455.5的蛋白质标记物2个，患儿组此2峰处的蛋白质表白强度分辨为299.7±134.6、1036.9±375.9，畸形对比组表白强度分辨为731.6±277.9、1799.3±556.7，2组比较差别有统计学意思(P＜0.01)。结合两个潜在标记物作为输入值，留一法穿插检测，在测试集上断定模型的特异性为100％，敏感度为100％。2．肾母细胞瘤患儿术后与术前、畸形对比组的比较与术前比较，术后2周24例标本2种蛋白质标记物表白均升高。19例根治术后标本2种蛋白质表白为702.7±198.2、1723.5±438.6，与畸形对比组比较差别无统计学意思(P＞0.05)；2例疑转移但行部分根治术跟3例行姑息性切除患儿标本表白为358.1±213.3、1107.9±402.2，与畸形对比组比较表白降落，差别有统计学意思(P＜0.01)。术后3、6个月跟踪复查时，19例根治术后患儿标本表白分辨为719.3±153.7、1708.4±213.8跟711.4±203.5、1756.3±377.2，与术前比拟呈高表白(P＜0.01)，与畸形对比组比较差别无统计学意思(P＞0.05)，余5例(1例于术后2月逝世亡)术后3、6个月标本分别为335.9±114.2、535.9±204.0跟238.6±53.5、411.3±167.2，与术前比拟呈低表白，差别无统计学意思(P＞0.05)，与畸形对比（文章此处忽略..）组比较呈持续低表白，差别有统计学意思(P＜0.01)，与术后2周比拟表白又有所降落，差别无统计学意思(P＞0.05)。论断1．m／z位于6984.5、6455.5的蛋白质构成的血清蛋白质指纹图谱模型对肾母细胞瘤预后监测存在很好的利用价值。2．应用SELDI-TOF-MS技巧结合生物信息学方法检测肾母细胞瘤患儿手术前后血清蛋白质标记物的差别，构建用于监测手术后果、猜测肿瘤复发的血清蛋白质指纹图谱模型，为肾母细胞瘤术后患者预后断定提供一种可能的新方法。

以上为本篇毕业论文范文血清蛋白质标记物检测在小儿肾母细胞瘤预后监测中的利用的介绍部分。

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