羟基喜树碱引诱人膀胱癌T24细胞凋亡及其机制的研究

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羟基喜树碱引诱人膀胱癌T24细胞凋亡及其机制的研究

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毕业论文范文题目：羟基喜树碱引诱人膀胱癌T24细胞凋亡及其机制的研究，论文范文关键词：羟基喜树碱引诱人膀胱癌T24细胞凋亡及其机制的研究
羟基喜树碱引诱人膀胱癌T24细胞凋亡及其机制的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目标膀胱癌是人类常见恶性肿瘤之一，重大威胁着人们的生命跟健康。膀胱癌在我国泌尿系肿瘤中的发病率占第1位，复发率高是其明显特点，因此绝大多数患者在进行肿瘤切除手术后需进行膀胱灌注化疗。为了寻找一种更为有效的灌注化疗药物，国内外学者都在进行不懈的尽力。羟基喜树碱(hydroxycamptothecin，HCPT)是从珙桐科动物喜树中提获得到的生物碱，从上世纪80年代开端利用于膀胱癌灌注化疗，并成为临床长进行膀胱癌化疗常用的药物之一，但其抗癌作用机制目前尚不非常明白。近年研究发明，引诱细胞凋亡是HCPT发挥抗肿瘤作用的重要机制。Bcl-2基因是Bcl-2基因家族中最早被发明，也是最重要的抗凋亡基因。有研究发明，很多凋亡刺激因素引诱细胞凋亡过程中，伴有Bcl-2蛋白表白程度的下调。降落Bcl-2蛋白表白程度可能是凋亡刺激因素引诱细胞凋亡的重要机制。本研究利用HCPT作用于体外培养的人膀胱癌T24细胞，察看其作用后果，并检（此处忽略..）测药物作用后人膀胱癌T24细胞的Bcl-2蛋白的表白程度，探讨羟基喜树碱对人膀胱癌T24细胞的凋亡引诱作用及其机制，深刻研究羟基喜树碱的生物学作用及其机制对膀胱癌的医治存在重要的意思。方法一、MTT法检测细胞存活率对数成长期人膀胱癌T24细胞调剂细胞浓度为1×10~5个/ml，接种于96孔培养板，24h后参加终浓度分辨为0.01、0.1、1、10μg/ml的羟基喜树碱，对比组参加等体积10％的1640培养液，每个浓度设6个平行孔。持续培养48h，MTT法检测细胞存活率。二、TUNEL法人膀胱癌T24细胞接种于盖玻片上，设对比组跟实验组，实验组采取1μg/ml羟基喜树碱处理48小时。从六孔板内取出盖玻片后，按照试剂盒阐明书操作，每个浓度反复3次，200倍光学显微镜下察看。每张盖玻片上随机计数500个细胞，计数凋亡细胞数占细胞总数的比率，即凋亡指数(apoptosisindex，AI)，打算公式：AI(％)=(凋亡细胞数/500)×100％。三、流式细胞仪(FcM)检测细胞凋亡率对数成长期人膀胱癌T24细胞调剂细（本文此处忽略..）胞浓度为1×10~5个/ml，接种于25cm~2细胞培养瓶，24小时细胞80％左右融合，收集对比组跟分辨经0.01、0.1、1、10μg/ml的羟基喜树碱处理48h的人膀胱癌T24细胞，PI单染后流式细胞仪下检测。每个浓度反复3次，每次计数10~4个细胞。采取CELLQUEST软件进行DNA含量分析，以G_0/G_1峰前呈现的亚二倍体细胞数量占细胞总数的百分率表示凋亡率。四、WesternBlot检测Bcl-2蛋白含量变更收集对比组跟羟基喜树碱(1μg/ml)处理48h的人膀胱癌T24细胞，提取细胞总蛋白。酚试剂法对提取的蛋白样品进行定量。细胞总蛋白作Bcl-2蛋白含量分析。每个样本反复3遍。细胞总蛋白以β-actin作内参照。采取Fluorchemv2.0凝胶成像分析软件(美国Alpha公司)对条带进行灰度扫描，以均匀灰度跟条带面积的乘积代表信号强度，以目标条带跟内参照灰度的比值表示蛋白含量。五、成果断定跟统计学分析实验所得数据以(?)±s表示，均数比较采取独破样本t测验或单因（略..）素方差分析q测验。百分率样本值进步行平方根反正弦转换后再进行测验。成果一、羟基喜树碱对T24细胞存活率的影响随羟基喜树碱浓度增加，A_(490)值逐步降落，人膀胱癌T24细胞存活率逐步降落。存活率与羟基喜树碱浓度呈明显负相干(r=-0.916，P0.05)。二、TUNEL法进行细胞凋亡的状况学察看TUNEL法染色可见阳性细胞萎缩，胞核呈棕黄或棕褐色，胞浆可因胞核内染色质泄漏而淡染，部分凋亡细胞萎缩成球形。200倍显微镜下，对比组仅可见极少阳性细胞，羟基喜树碱处理组阳性细胞数明显增多。对比组跟1μg/ml羟基喜树碱处理组的AI分辨为0.56％、22.32％，组间差别均有明显性(P0.05)。三、凋亡率检测随羟基喜树碱浓度增加，FCM检测人膀胱癌T24细胞凋亡率逐步增加。对比组跟0.01、0.1、1、10μg/ml的羟基喜树碱处理组凋亡率分辨为0.96％、12.17％、19.38％、31.82％、47.12％。0.01、0.1、1、10μg/ml的羟基喜树碱处理组凋亡率与对比组比拟明显升高(P均0.01)。四、羟基喜树碱对人膀胱癌T24细胞Bcl-（略..）2蛋白含量变更的影响羟基喜树碱对Bcl-2蛋白含量的影响：对提取的细胞总蛋白进行WesternBlot检测发明，对比组跟羟基喜树碱处理组均有Bcl-2蛋白表白，但羟基喜树碱处理组表白程度与对比组无明显差别，差别不存在明显性(P0.05)。论断羟基喜树碱存在促进人膀胱癌T24细胞凋亡的作用，其促凋亡作用存在剂量依附性，这为进一步懂得膀胱癌细胞凋亡信号的转导跟羟基喜树碱的生物学作用提供了实验根据跟实际基本。

以上为本篇毕业论文范文羟基喜树碱引诱人膀胱癌T24细胞凋亡及其机制的研究的介绍部分。

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