万古霉素引诱下粪肠球菌V583及临床分别株V309的比较蛋白质组学研

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万古霉素引诱下粪肠球菌V583及临床分别株V309的比较蛋白质组学研

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毕业论文范文题目：万古霉素引诱下粪肠球菌V583及临床分别株V309的比较蛋白质组学研，论文范文关键词：万古霉素引诱下粪肠球菌V583及临床分别株V309的比较蛋白质组学研
万古霉素引诱下粪肠球菌V583及临床分别株V309的比较蛋白质组学研毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：肠球菌通常为前提致病菌。当产生异位寄生时,肠球菌可引起多种感染,如泌尿系感染、心内膜炎、脑膜炎、败血症、伤口感染、呼吸道感染等,重大的可危及生命。与其余革兰氏阳性菌比拟,肠球菌属存在更强的天然耐药性,且易被抗生素引诱产生新的耐药性。近年来,因为免疫克制剂在临床医治中广泛利用,以及广谱抗生素的适度利用及不公道利用等因素导致肠球菌属感染跟耐药性日益增多,已成为院内感染的重要致病菌。跟着耐万古霉素肠球菌(Vancomycin-ResistantEnterococci,VRE)的呈现,临床医治耐药菌感染面临着更大的艰苦。VRE的耐药基因可通过质粒转移给其余致病菌,跟着近年来报道的由VRE导致的耐万古霉素金黄色葡萄球菌(Vancomycin-ResistantStaphylococcusaureus,VRSA)的呈现,人们对VRE的耐药机制更加关注。本文对临床分别到的耐万古霉素粪肠球菌(EnterococcusFaecalisV309,EFV309)菌株进行了分型鉴定,特点研究及比较蛋白质组学研究,进一步阐明了粪肠球菌对万古霉素的耐药机制,并首次对万古霉素对耐药基因引诱的特异性跟可逆性及万古霉素引诱下菌体蛋白磷酸化润饰作用进行了研究,为把持耐药基因的传播跟领导临床用药奠定基本。首先,利用蛋白质双向电泳技巧,对万古霉素耐药粪肠球菌标准菌株EFV583及临床分别耐万古霉素粪肠（文章此处忽略..）球菌菌株EFV309在加药引诱前后及加药后去除药物等前提下的菌体蛋白表白情况进行了对比分析。通过ImageMaster软件分析各组电泳图谱,找出差别蛋白点,对表白量差别3倍以上的蛋白质点进行质谱鉴定。利用多功能串联飞翔时光质谱(MALDI-TOF/TOF-MS),共鉴定到57个有意思的蛋白,其中大多数蛋白质点的pI跟分子量与实际值相符,但也有一些存在差别。本研究在V309中鉴定到20个上调蛋白、6个下调蛋白及4个产生位移的蛋白,在V583中鉴定到28个上调蛋白、8个下调蛋白及1个产生位移的蛋白。利用半定量RT-PCR在反转录程度上也验证了这些蛋白编码基因表白量的相应变更。其中包含部分已知耐药相干蛋白VanA、VanX(V309)及VanB、VanXB(V583),它们在万古霉素引诱下均有20倍以上的上调表白,且存在翻译后润饰。值得关注的是在V309中VanA、VanX在未经万古霉素引诱时也表白,这与V583不同,表明两者耐药的分子机制不尽雷同。此外,还鉴定到一些耐药机制尚不十明显确的蛋白,包含毒力相干因子(EF2076、EF0577、EF3256)、应激蛋白(EF1308、EF1744、EF0080)、代谢相干蛋白、翻译相干蛋白、接合转移相干蛋白及一些假想蛋白。这些蛋白可能与细胞粘附机制、耐药性的转移与表白、耐药基因的获取与基因重组修复、菌体内酶的活化与克制有密切关联。咱们对这些蛋白在菌体中可能发挥的功能进行了分析。在对万古霉素对耐药基因引诱的特异性的研究中,将EF（文章此处忽略..）V583、EFV309菌株在万古霉素引诱培养8h、12h、16h后,跟着药物引诱时光的延长,耐药相干蛋白VanA、VanB、VanX的表白量也随之明显升高,阐明了药物对这些蛋白的引诱是特异性的。在对万古霉素对耐药基因引诱的可逆性研究中,将EFV583、EFV309菌株在不加跟加万古霉素引诱培养6h后,分辨去除跟不去除万古霉素引诱,持续培养6h。成果显示当药物引诱因素去除后,在引诱培养时表白量升高的耐药相干蛋白VanA、VanB、VanX表白量又明显降落,阐明了药物对这些蛋白的引诱是可逆性的。通过RT-PCR的检测,证明耐药相干蛋白编码基因在各个前提下表白量的变更与对应蛋白的变更一致。此外,有6个蛋白可能存在翻译后润饰(Gpm、Ldh、Gap2、RpsB、EF2076、EF3256)。菌体中存在的蛋白翻译后润饰,通常是因为氨基酸润饰或肽段断裂引起的蛋白电荷或分子量的改变,表示为蛋白点丰度或地位的迁徙。本研究中发明V583及V309分辨有1个及4个蛋白在万古霉素引诱培养后产生了位移,即Esa(EF2076)及Pgm1(EF0195)、Ldh(EF0255)、Gap-2(EF1964)、RpsB(EF2398),揣测可能是磷酸化润饰或其余润饰引起分子量及等电点变更的成果。利用Pro-Q染色及WesternBlots技巧共鉴定到3个磷酸化蛋白Ldh、Gap-2、cAD1,通过PHOSIDA数据库进行同源性比对,断定了其可能的磷酸化位点。这也是首次在粪肠球菌中鉴定到磷酸化蛋白。其中性激素（此处忽略..）cAD1前体脂蛋白(EF3256)有5个同源异构体,通过Pro-Q染色发明它存在明显的磷酸化翻译后润饰,且在经万古霉素引诱培养后的菌体中其磷酸化水均匀明显加强,WesternBlot检测证切实EF3256中同时存在丝氨酸跟苏氨酸的磷酸化。但性激素cAD1前体脂蛋白既不已知的磷酸化功能域(Phosphorylationmotif,PMF)也无奈在相干磷酸化肽段数据库(PHOSIDA)中找到其同源性构造。已知很多耐药因子的程度传播归因于性激素依附的质粒转移,但目前有关性激素cAD1前体脂蛋白的磷酸化及其在细胞信号调节中的作用都未有过报道,因此须要进一步对其功能进行研究。在粪肠球菌V583中,性激素cAD1前体脂蛋白由309个氨基酸组成,在信号序列中有一个22个氨基酸组成的带有半胱氨酸残基的脂质区,最后的8个氨基酸构成了cAD1,位于脂蛋白信号序列之后的Sec依附的输出部位为假设的信号肽切割位点。因为另一种可能将性激素cCF10转移至胞内的性激素转运蛋白(OppA-likeprotien)在万古霉素引诱的V309菌株中明显上调,因此胞外的cAD1应是与OppA-like膜名义脂蛋白结合进步了受体菌的感触性,并经过ABC肽转运体系接收。这暗示了万古霉素能增加质粒产生接合转移的可能性,并加强对外源细菌的感触性。咱们揣测V583跟V309中磷酸化性激素cAD1前体脂蛋白可能是一种激活状况,在性激素在细胞信号传导中起重要作用。通过引（略..）诱毒力相干基因表白及质粒的接合转移,万古霉素使粪肠球菌更轻易获得或传播质粒,尤其对带有耐药基因的菌株。粪肠球菌的耐药性,尤其是对万古霉素的获得性耐药是与其基因组特点周到相干的。目前,可能已有无奈计算的毒力相干及耐药挪动元件被粪肠球菌基因组整合。本文中对粪肠球菌V583跟V309的比较蛋白质组学研究丰富了对其生理特点的研究,同时也支撑由Paulsen等提出的挪动DNA元件作为万古霉素耐药性的转移因子及糖肽类耐药分子机制的假设。更重要的是,通过该研究断定了部分万古霉素耐药相干蛋白,并且证明了一些在万古霉素调节作用下差别性表白的抗生素耐药蛋白激发了内源信号调剂因子、粘附因子及代谢相干基因的表白。这一系列反应都使得粪肠球菌可能在万古霉素压力下持续生存跟引起发病。本研究成果对揭示粪肠球菌耐药的分子机制,从而找到相应的把持策略存在重要的意思。

以上为本篇毕业论文范文万古霉素引诱下粪肠球菌V583及临床分别株V309的比较蛋白质组学研的介绍部分。

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