以AAV为载体的RNAi在沉默膀胱癌5637细胞E2F3基因实验中的利用

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以AAV为载体的RNAi在沉默膀胱癌5637细胞E2F3基因实验中的利用

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毕业论文范文题目：以AAV为载体的RNAi在沉默膀胱癌5637细胞E2F3基因实验中的利用，论文范文关键词：以AAV为载体的RNAi在沉默膀胱癌5637细胞E2F3基因实验中的利用
以AAV为载体的RNAi在沉默膀胱癌5637细胞E2F3基因实验中的利用毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：膀胱癌是泌尿体系最常见的恶性肿瘤之一,膀胱癌中最常见的病理类型为移行细胞癌。膀胱移行细胞癌的恶性生物学特点包含:多灶性、多基因参加、多阶段异质性成长、易复发、转移等。膀胱癌目前的医治重要包含手术跟术后腔内灌注抗癌药物,然而膀胱移行细胞癌易复发跟对化疗药物的耐药性始终是临床医治的棘手困难之一。基因医治经过近20多年的发展已被认为是继手术、化疗等惯例医治方法之后极有盼望成为有效医治膀胱移行细胞癌的方法之一。目前基因医治中有效的靶点及医治方法的抉择是基因医治利用于临床的妨碍,而RNA烦扰(RNAinterference,RNAi)的发明为寻找基因医治的靶点带来了新思路。RNAi是一种非常保守的基因沉默机制。在原始生物中RNAi可能保护基因组免受病毒或者其它基因片段的插入（本文此处忽略..）,并且在生物的发育过程中调节众多基因的表白。短的双链RNA中的反义链与RNA沉默引诱复合物相结合后可能与同源的mRNA序列特异性的结合,导致mRNA切堵截裂及随后呈现的转录后程度基因表白的降落。因此RNAi为咱们提供了医治肿瘤的新思路。因为RNAi必须在细胞内进行,故高效、保险的转导载体进入细胞内成为RNAi顺利履行的前提。腺相干病毒(adeno-associatedvirus,AAV)载体是近年来研究最为广泛、最受关注的基因医治载体。因为其宿主范畴广、免疫原性低、保险性高、牢固性好等特点,AAV载体被认为是将来基因医治中最有盼望的新一代病毒载体。至今,AAV载体已被用于携带各种不同抗血管生成基因进举动物肿瘤模型的医治,其成果显示存在非常好的利用前景。E2F3是细（此处忽略..）胞周期调控过程中起核心作用的转录因子,其把持着细胞增殖过程(DNA复制及细胞周期调控)中众多基因的表白,是细胞合成间期中由G_1进入S期所必须的转录因子。E2F3的高表白在人类膀胱移行细胞癌中比较常见,目前很多学者认为,E2F3的高表白与移行细胞癌的产生发展密切相干,降落E2F3在移行细胞癌中的表白,可能会克制移行细胞癌的成长。目标:为了摸索AAV载体是否可能在膀胱癌细胞中有效地应用于RNAi,是否可能有效地使小分子烦扰RNA片段(smallinterferingRNA,siRNA)进入细胞内,并发挥作用。本实验利用AAV载体的RNAi的方法,以E2F3基因为医治靶点进行移行细胞癌5637细胞基因医治,察看是否有效降落E2F3基因的mRNA、蛋白程度的表白,并为后续的以E2F3为靶点的移行细胞癌基（略..）因医治体内实验提供必定的实际根据。方法:用AAV-Helperfreesystem包装体系,pRC,pHelper质粒共转染,AAV-293细胞包装腺相干病毒,采取“氯仿-PEG/NaCl积淀一氯仿抽提”来进行AAV病毒的粗纯化、冰乙醇积淀法稀释腺相干病毒;用AVSachTMELISA法测定病毒rAAV颗粒滴度;采取SDS-PAGE鉴定病毒后将rAAV-siRNA-E2F3转染膀胱移行细胞癌5637细胞。通过RT-PCR、Westernblot方法检测烦扰前后E2F3的mRNA、蛋白程度的变更。成果:通过用AVSachTMELISA法测定病毒rAAV2颗粒滴度为5.6×10~(13)v.p/mL;采取SDS-PAGE鉴定病毒后,断定成功包装AAV。转染后30分钟即可察看到绿色荧光的表白。RT-PCR（文章此处忽略..）成果显示膀胱移行细胞癌5637细胞中重组AAV转染E2F3基因与GAPDH基因光密度的比值与空白组比拟均匀降落了69.84%(P0.01)。Westernblot成果显示5637细胞中重组AAV转染E2F3蛋白与GAPDH蛋白光密度的比值与空白组比拟均匀降落了83.27%(P0.01)论断:AAV可能高效的转染移行细胞癌5637细胞,细胞内的siRNA可能降落移行细胞癌5637细胞中E2F3的mRNA、蛋白程度。本实验表明E2F3基因有可能成为移行细胞癌基因医治的靶点,并有可能为后续的以E2F3为靶点的移行细胞癌基因医治体内实验提供必定的实际根据。

以上为本篇毕业论文范文以AAV为载体的RNAi在沉默膀胱癌5637细胞E2F3基因实验中的利用的介绍部分。

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