腺病毒介导的HSV-TK基因体系结合化疗药物医治人膀胱癌细胞的体外

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腺病毒介导的HSV-TK基因体系结合化疗药物医治人膀胱癌细胞的体外

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毕业论文范文题目：腺病毒介导的HSV-TK基因体系结合化疗药物医治人膀胱癌细胞的体外，论文范文关键词：腺病毒介导的HSV-TK基因体系结合化疗药物医治人膀胱癌细胞的体外
腺病毒介导的HSV-TK基因体系结合化疗药物医治人膀胱癌细胞的体外毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究背景：膀胱癌是泌尿系最常见的恶性肿瘤之一，也是一个重要的公共卫生问题，世界上每年诊断的膀胱癌超过200000例，每年约有12000人逝世于膀胱癌。在美国，位于最常见的恶性肿瘤中的第4位，在我国，发病率位于泌尿生殖体系肿瘤的第一位。膀胱癌90％以上为移行上皮细胞癌，15％左右的膀胱癌患者初诊时即存在部分或远处转移病灶，20％～30％表浅性膀胱癌术后将发展为浸润性或转移性癌，根治性膀胱切除术后30％～40％的浸润性膀胱癌呈现远处转移，远期疗效不佳。特别是表浅性膀胱癌经尿道切除后的高复发率已经成为了医治中亟待解决的问题。跟着自杀基因(suicidegene)体系对膀胱癌医治研究的逐步深刻，大家逐步意识到自杀基因体系是一种发展前景良好的医治方法，然而也存在着如基因转染效力低下，基因转导的靶向性差，各类载体及自杀基因本身对机体的毒性跟伤害作用，载体及肿瘤细胞杀逝世后引发的本身免疫反应，前体药物代谢产物仅仅针对决裂期细胞等局限性。为了补充自杀基因医治体系的不足，越来越多的学者都在致力于研究将现有的医治方法跟自杀基因医治体系相结合，以寻找对抗膀胱癌复发的新思路跟新道路。羟基喜树碱(HCPT)、吡柔比星(THP)是目前临床防备膀胱癌复发的膀胱灌注化疗药物。HCPT是从珙桐科动物喜树(CamptothecaacuminataDecne)中提获得到的一种微量生物碱，抗瘤谱广，可能（略..）抉择性地克制拓朴异构酶而烦扰DNA的复制，跟其余抗肿瘤药物无穿插耐药，有良好的协同作用。利用HCPT这一特有的性质，结合TK基因结合医治膀胱癌的方法目前尚无相干报道。THP是新一代半合成蒽环类抗肿瘤药物，是在阿酶素的氨基糖4’端加了一个吡喃环，使它抗肿瘤的活性、靶细胞的药物浓度明显进步，半衰期缩短，毒副作用明显减少。它进入细胞核，嵌入DNA的双螺旋链，克制DNA聚合酶A跟B，禁止了核酸的合成，使肿瘤细胞不能进行细胞决裂而导致肿瘤细胞逝世亡。本实验采取HSV-TK体系结合小剂量化疗药物(HCPT、THP)对人膀胱癌T—24进行医治，并对其体外杀伤作用进行比较，为自杀基因结合化疗药物医治膀胱癌提供必定的实验根据。目标：1、研究腺病毒介导的HSV-TK体系结合小剂量羟基喜树碱(HCPT)对人膀胱癌细胞的体外杀伤作用。2、研究腺病毒介导的HSV-TK体系结合小剂量吡柔比星(THP)对人膀胱癌细胞的体外杀伤作用。方法：1、体外培养T—24细胞；2、利用含有单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplexvirus-thymidinekinase，HSV-TK)基因跟绿色荧光蛋白(greenfluorscentprotein，GFP)基因的复制缺点腺病毒(AdCMV-TK，Adv)转染293细胞，扩增腺病毒；用绿色荧光蛋白表白细胞计数测定腺病毒滴度。3、腺病毒感（略..）染人膀胱癌细胞T—24，获取转染TK基因的T—24细胞。分辨提取人膀胱癌细胞T—24以及转染TK基因T—24细胞RNA，进行RT-PCR反应，电泳鉴定。4、在体外培养T—24的细胞培养液中，参加HCPT，HCPT浓度为0、0.001、0.01、0.1、1、10、50、100、200mg／L，采取四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定单纯HCPT作用人膀胱癌细胞72h细胞增殖克制率，断定HCPT的有效作用浓度。5、在体外培养T—24的细胞培养液中，参加THP，THP浓度为0、0.1、1、10、100mg／L，同样采取MTT法测定单纯THP作用人膀胱癌细胞72h细胞增殖克制率，断定THP的有效作用浓度。6、根据HCPT的有效作用浓度，抉择对T—24细胞杀伤作用较小的浓度梯度(0.01、0.05、0.1、0.5、1mg／L)。同时根据以前的实验成果，断定利用对T—24细胞杀伤作用较小GCV浓度(0.25mg／ml)。以畸形T—24细胞为空白对比，采取MTT法测定各组医治转染后人膀胱细胞24h、48h、72h细胞存活率。7、根据THP的有效作用浓度，抉择对T—24细胞杀伤作用较小的浓度梯度(1、5、10、15、20mg／L)。结合GCV(0.25mg／ml)对转染后人膀胱细胞进行医治。以畸形T—24细胞为空白对比，采取MTT法测定各组医治24h、48h、72h细胞存活率。成果：1、293细胞能大量扩增腺病毒，纯化后腺病毒滴度为1.58×10~(10)PFU／ml。2、经RT-PCR扩增转染腺病毒的T—24细胞呈现大小为234bp的TK基因片段，而未转染腺病毒的T—（文章此处忽略..）24细胞未扩增出相应片段，表明感染腺病毒的T—24细胞有TK基因mRNA表白。3、跟着浓度的增高，HCPT对T—24细胞的成长克制率逐步增高，HCPT浓度为0.01mg／L时T—24成长克制率为13.63％，50mg／L时T—24成长克制率为64.44％，当HCPT浓度大于100mg／L时，克制造用无明显增加(P=0.117)。表明HCPT可能良好的克制人膀胱癌细胞的成长，同时有浓度依附性。4、THP浓度小于1mg／L，对T—24成长克制率小于30％，大于1mg／L至100mg／L，克制曲线明显变陡，浓度为50mg／L时，克制率为62.94％，浓度为100mg／L时，克制率达到93.22％。跟着THP浓度的增加，对T—24细胞的克制造用也明显加强(P=0.00)。5、GCV+HCPT各组跟单独利用GCV组比拟，对转染后细胞有明显杀伤作用有明显的加强(P=0.00)，GCV+HCPT组随HCPT浓度增高跟作用时光的延长，杀伤效力明显增高。0.25mg／mlGCV单独作用于转染后的膀胱癌细胞72h后，细胞存活率为54.40％，GCV(0.25mg／ml)+HCPT(1mg／L)组的细胞存活率仅为33.57％(P=0.00)。提示HSV-TK／GCV体系结合小剂量HCPT可能加强对人膀胱癌细胞T—24的杀伤作用，且优于单一利用HSV-TK／GCV体系。6、GCV+THP各组对转染后膀胱癌细胞作用72小时后也均较GCV组有明显的加强(P=0.00)，各组之间的杀伤效力跟着浓度梯度的增加也有明显增高(P=0.00)。表明HSV（本文此处忽略..）-TK／GCV自杀体系结合小剂量THP医治时，也能加强医治组的杀伤作用，并表示出跟GCV+HCPT组雷同的浓度、时光相干性。论断：1、腺病毒载体能有效的将HSV-TK基因导入人膀胱癌细胞中表白；2、羟基喜树碱可能在体外对人膀胱癌T—24细胞进行有效的杀伤；3、吡柔比星可能在体外对人膀胱癌T—24细胞进行有效的杀伤；4、HSV-TK／GCV体系结合小剂量化疗药物羟基喜树碱能加强自杀基因体系对人膀胱癌细胞的体外杀伤作用；5、HSV-TK／GCV体系结合小剂量化疗药物吡柔比星医治能加强自杀基因体系对人膀胱癌细胞的体外杀伤作用。

以上为本篇毕业论文范文腺病毒介导的HSV-TK基因体系结合化疗药物医治人膀胱癌细胞的体外的介绍部分。

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