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制备淋病奈瑟菌黏附因子受体hCD46和hCEACAM1转基因小鼠的前期研

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毕业论文范文题目:制备淋病奈瑟菌黏附因子受体hCD46和hCEACAM1转基因小鼠的前期研,论文范文关键词:制备淋病奈瑟菌黏附因子受体hCD46和hCEACAM1转基因小鼠的前期研
制备淋病奈瑟菌黏附因子受体hCD46和hCEACAM1转基因小鼠的前期研毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:淋病奈瑟菌(Neisseriagonorrhoeae)俗称淋球菌(gonococcus),为革兰阴性双球菌,是人类淋病(Gonorrhea)的病原菌,主要引起泌尿生殖道系统黏膜的急性或慢性化脓性感染。淋病是世界范围内发病率较高的性传播疾病(STD)之一,每年新发病例约六千二百万。随着淋病奈瑟菌耐药性的日趋增强,淋病的治疗也越来越困难。因此,研制有效的淋病疫苗和治疗药物成为目前淋病防制工作中的重点任务。然而,淋病奈瑟菌的唯一宿主是人类,淋病研究一直为缺乏有效的动物模型所困扰。研究表明,人类细胞膜上存在多种参与淋病奈瑟菌黏附定植的特异性受体,如菌毛受体hC(此处忽略..)D46、Opa蛋白受体hCEACAM1等。因此,表达hCD46和hCEACAM1的转基因小鼠可望成为淋病研究的理想动物模型。为制备模拟人体CD46表达特性的转基因小鼠,首先提取HeLa细胞基因组DNA为模板,利用PCR技术克隆了hCD46基因启动子。序列分析结果显示,自行克隆的hCD46基因启动子与1993年发表的该区序列仅有96.4%的同源性,二者间有21处共43个碱基出现差异;但与2006年完成测序的人类基因组中hCD46基因5’端某片段只有2个碱基的差异,同源性达99.9%。表明克隆的hCD46基因启动子序列正确。然后构建以hCD46基因启动子指导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因表达的真核表达载体,并利用兔β-(本文此处忽略..)球蛋白第二内含子(GI)增强cDNA基因的表达水平。经细胞表达实验证实,克隆的hCD46基因启动子指导目的基因在CHO细胞中的表达水平显著高于在SP2/0细胞中,启动的组织特异性与人体相似。兔β-球蛋白第二内含子可以显著增强启动子的启动效率,但不改变其启动的组织特异性。提示克隆的hCD46基因启动子保持其原有的启动特性。人类基因组中CD46基因启动子和第一外显子紧密相连,据此用连接PCR技术扩增出启动子与cDNA相连的hCD46完整基因,并用其置换出pcDNA3.1中的CMV启动子,构建成重组真核表达载体pCD46。同时构建了用hCD46基因启动子指导hCEACAM1cDN(本文此处忽略..)A表达的重组真核表达载体pCDPCAM1-GI,该载体中用兔β-球蛋白第二内含子增强目的cDNA基因的表达。分别将pCD46、pCDPCAM1-GI和pCD46+pCDPCAM1-GI转染COS-1细胞,通过G418筛选以及流式细胞仪检测证实相应目的基因表达之后再进行淋病奈瑟菌的黏附试验。实验结果表明,淋病奈瑟菌可以黏附这3种重组COS-1细胞,并且对hCD46+hCEACAM1共表达COS-1细胞的黏附能力最强。这些结果为hCD46和hCEACAM1转基因小鼠可作为淋病奈瑟菌感染研究的动物模型提供了实验依据。分别将表达hCD46、hCEACAM1的基因构件、这两种基因构件的等摩尔(此处忽略..)数混合物通过显微注射法注射入小鼠受精卵中,得到hCD46转基因F0代小鼠49只、hCEACAM1转基因F0代小鼠22只,hCD46+hCEACAM1转基因F0代小鼠48只。经PCR反复检测表明,目前已得到4只hCD46基因整合阳性的转基因小鼠,转基因表达尚在检测中;hCEACAM1转基因小鼠、hCD46+hCEACAM1共表达转基因小鼠也在进一步检测。


以上为本篇毕业论文范文制备淋病奈瑟菌黏附因子受体hCD46和hCEACAM1转基因小鼠的前期研的介绍部分。
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