应用体外细胞培养系统筛检抗HBV活性中药的实验研究

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应用体外细胞培养系统筛检抗HBV活性中药的实验研究

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毕业论文范文题目：应用体外细胞培养系统筛检抗HBV活性中药的实验研究，论文范文关键词：应用体外细胞培养系统筛检抗HBV活性中药的实验研究
应用体外细胞培养系统筛检抗HBV活性中药的实验研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的:乙型肝炎是威胁人类健康的一种严重疾病,乙肝病毒(HBV)的感染在世界范围内广泛流行,全球慢性HBV感染者约3.5亿[1]。我国是病毒性肝炎高发区,仅HBV携带者就达1.2亿,其中慢性乙型肝炎患者有3000万以上,但至今尚未取得治疗上的根本突破。尽管已有干扰素及核苷类等抗HBV药物,但长期应用可引起病毒耐药,再度活跃病毒复制等诸多副反应[2,3]。因此,寻找安全有效的抗HBV药物已成为当今医药学界一项重要任务。近年来,中草药抗HBV已成为国内外的研究热点[4]。中医学认为乙型肝炎主要是由于湿热之毒蕴积于肝所致,在治疗上当以清热解毒,疏肝利湿,健脾为主。诸多研究发现中药在抗病毒、免疫调节、保肝方面有明显的临床效应。本课题采用HBV基因转染的人肝癌细胞HepG2.117细胞模型[5]筛检单味中药半枝莲、珍珠草、女贞子和青蒿抑制HBsAg、HBeAg和HBVDNA（本文此处忽略..）的作用,为临床中西医结合治疗肝病提供参考依据。方法:HepG2.117细胞培养,细胞长满培养瓶后,用0.25%胰酶消化,配成浓度1×105个细胞/ml,转接种于24孔培养板,每孔1ml,置37℃含5%CO2饱和湿度下培养,用DMEM完全培养基换液,3-4d后,细胞长满培养板底,即可进行实验。实验分为9个组,含8个药物组和1个空白对照组,其中,8个药物组中含有4个单味中药组、2个复方药物组和2个阳性对照组。单味中药分别为半枝莲、珍珠草、女贞子和青蒿;复方药物分别为枝莲清肝胶囊和枝莲清肝胶囊加拉米夫定;阳性对照药物分别为拉米夫定和苦参素。实验的每个组都设3个平行孔,药物组用含药的培养基换液,空白对照组用DMEM完全培养基换液,每24h换1次,分别于用药24h、48h、72h后收取细胞上清液,置-20℃保存备测。采用SargentJM等[6]建立的四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析法检测药物对细胞的毒性作用,采用酶联免（文章此处忽略..）疫吸附试验(ELISA)法检测培养上清液中HBsAg和HBeAg的水平,采用荧光定量PCR法检测上清液HBVDNA的水平,从而评价药物的抗HBV作用。应用SASV8.1软件进行统计学处理:计量资料用均数±标准差(x±SD)表示,P0.05为差异有统计学意义。结果:MTT比色OD值比较,药物组与对照组间差异均无显著性,提示所选浓度药物对HepG2.117细胞生长无毒性作用。ELISA比色OD值比较,单味中药组中,半枝莲、珍珠草、女贞子与空白对照组HBsAg、HBeAg比较差异有显著性(P0.05);复方药物组中,枝莲清肝胶囊和枝莲清肝胶囊加拉米夫定与空白对照组HBsAg、HBeAg比较差异有显著性(P0.05);阳性对照组中,拉米夫定和苦参素与空白对照组比较均有显著性差异(P0.05);而青蒿组与空白对照组比较无显著性差异(P0.05)。HBsAg比较,单味中药中,半枝莲在24h和72h时抑制率最高（此处忽略..）,分别为27.98%和33.97%,珍珠草在48h时抑制率最高,为13.81%;复方药物中,枝莲清肝胶囊在24h和72h时抑制率最高,分别为30.05%和36.26%,枝莲清肝胶囊加拉米夫定在48h时抑制率最高,为24.69%;阳性对照中,拉米夫定在24h、48h和72h时抑制率均是最高,分别为35.75%、21.05%和40.08%。HBeAg比较,单味中药中,半枝莲在48h和72h时抑制率最高,分别为13.16%和23.48%,珍珠草在24h时抑制率最高,为5.77%;复方药物中,枝莲清肝胶囊加拉米夫定在24h、48h和72h时抑制率均是最高,分别为14.10%、11.58%和28.34%;阳性对照药物中,拉米夫定在24h、48h和72h时抑制率均是最高,分别为10.26%、13.68%和28.74%。HBVDNA比较,除青蒿组外,其他各实验药物组与空白对照组比较均有显著性差异(P0.05),其中单味中药组中,半枝莲的抑制率最高,为31.36%;复方药物组中,枝莲清肝胶囊加拉米夫定的抑制率最高,为42.01%;阳性对照药物组中,拉米夫定的抑制率最高,为43.42%。结论:在1mg/ml浓度下,半枝莲（本文此处忽略..）、珍珠草、女贞子三种单味中药均有抑制HBV的作用,其中,半枝莲的抑制率最高,为30.74%,青蒿无抑制HBV的作用;复方药物中,枝莲清肝胶囊加拉米夫定的抑制率最高,为42.01%;阳性对照药物中,拉米夫定抑制HBV的作用最佳,抑制率为43.42%。

以上为本篇毕业论文范文应用体外细胞培养系统筛检抗HBV活性中药的实验研究的介绍部分。

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