牛乳溶菌酶在毕赤酵母中的分泌表白及活性分析

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牛乳溶菌酶在毕赤酵母中的分泌表白及活性分析

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毕业论文范文题目：牛乳溶菌酶在毕赤酵母中的分泌表白及活性分析，论文范文关键词：牛乳溶菌酶在毕赤酵母中的分泌表白及活性分析
牛乳溶菌酶在毕赤酵母中的分泌表白及活性分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：溶菌酶是人跟动物体液跟组织中的一种防备因子,长短特异性免疫的重要组成部分,存在抗菌、消炎、促进组织修复跟加强免疫力等多种药理作用,因此广泛利用于食品、饲料产业、科研跟医学临床中。牛乳溶菌酶(Bostauruslysozyme1-LYZ1)作为c型溶菌酶中的一种,在医治奶牛子宫内膜炎、乳房炎等细菌性疾病中,不仅存在类似的生物学作用,还存在同源性的上风,存在广阔的利用前景。然而因为天然溶菌酶(包含牛乳溶菌酶)的提取步骤繁琐,本钱昂扬,难以大量的利用于临床。因此,本研究（略..）拟通过构建大肠杆菌跟毕赤酵母表白体系来制备存在生物活性的重组LYZ1蛋白,以调换天然牛乳溶菌酶,利用于临床实际,研究详情如下:(1)根据GenBank(NM-001077829)发表的牛乳溶菌酶基因核苷酸序列,抉择大肠杆菌跟酵母偏爱密码子改革并人工合成LYZ1基因,并在基因上、下游分辨引入EcoRI与XhoI酶切辨认位点,为了便于后期分别纯化,设计时在基因中引入了his-tag。(2)经测序鉴定正确后,将LYZ1基因克隆到表白载体pET-32a上,经PCR、双酶切跟测序鉴定后重组表白质粒pET-（文章此处忽略..）32a-LYZ1转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,获得牛乳溶菌酶工程菌株BL21/pET-32a-LYZ1,经IPTG引诱表白了32Ku大小重组的目标蛋白,表白量占菌体总蛋白的70%,重要以包涵体情势存在,存在很好的免疫原性,纯化后纯度达95%以上,将其免疫BALB/c小鼠获得牛乳溶菌酶重组蛋白的单因子血清,用于酵母表白重组蛋白的鉴定。(3)在基因LYZ1末端增加XbaⅠ酶切位点后,构建了牛乳溶菌酶的分泌型表白载体pPICZαA-LYZ1,SacⅠ酶切线性化后电转化毕赤酵母菌株GS115,通过Zeocin筛（略..）选跟PCR鉴定后,获得牛乳溶菌酶工程菌株GS115/pPICZαA-LYZ1,经甲醇引诱60h后,进行SDS-PAGE跟WesternBlotting鉴定表明上清中高效分泌表白了16Ku大小的重组目标蛋白,存在良好的免疫原性,表白上清经超滤管稀释后,过his-tag柱纯化,测得上清中重组蛋白浓度为218mg/L,采取溶壁微球菌法测定上清中溶菌酶活性为2842U/mL,比活力约为13040.0U/mg,体外抑菌实验成果表明,重组牛乳溶菌酶对标准葡萄球菌及大肠杆菌菌株存在较好的抗菌作用,而对无乳链（本文此处忽略..）球菌、停乳链球菌、乳房链球菌作用较弱。综上所述,本研究成功构建了牛乳溶菌酶的原核表白载体pET-32a-LYZ1跟酵母分泌型表白载体pPICZαA-LYZ1,并在受体菌BL21(DE3)跟GS115中成功表白,其中酵母上清分泌表白的重组蛋白LYZ1存在抗菌活性,为进一步研究与利用奠定基本。

以上为本篇毕业论文范文牛乳溶菌酶在毕赤酵母中的分泌表白及活性分析的介绍部分。

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