组蛋白乙酰化对骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化的调控作用及机

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组蛋白乙酰化对骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化的调控作用及机

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毕业论文范文题目：组蛋白乙酰化对骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化的调控作用及机，论文范文关键词：组蛋白乙酰化对骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化的调控作用及机
组蛋白乙酰化对骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化的调控作用及机毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：括约肌功能妨碍(ISD)是压力性尿失禁(SUI)的重要起因,现有的医治方法包含手术医治跟非手术医治,但这些方法仅改变了盆底解剖构造,均不能改正ISD,不能从本质上恢复患者的括约肌功能。鉴于近年来应用于细胞移植修复肌肉伤害、改良肌肉紧缩功能的报道,人们对干细胞移植医治SUI寄托厚望。然而至今为止该疗法并不获得预期的疗效,究其起因是因为干细胞移植后既往的研究仅关注了移植后细胞表型的变更,对其在体内外分化的机制研究甚少,导致人们不能很好的应用其分化的才能达到医治疾病的目标,因此研究干细胞在体内外微环境引诱下的适应性变更及机制显得非常重要。近年来,组蛋白润饰对干细胞分化的影响引起了人们的关注,组蛋白润饰是指不改变细胞DNA序列,通过组蛋白亚基产生乙酰化、甲基化等共价润饰,这些润饰可为基因的表白提供一种辨认的标记,为其余蛋白与DNA的结合产生协同或拮抗效应,它是一种动态转录调控成分,称为组蛋白密码。这些密码可被特定蛋白质辨认,将其翻译成特定的染色质状况以实现对特定基因的调节,其中,与特异性基因转录调控关联最为密切的是组蛋白乙酰化润饰,研究表明,组蛋白H3亚基上赖氨酸残基的乙（略..）酰化在染色质包装跟基因转录调控中表演侧重要的角色。个别而言,组蛋白H3K9乙酰化与基因的活化有着密切的关联,相反的,H3K9去乙酰化与基因的沉默相干。一旦有乙酰化的存在,DNA的构型产生松解,转录因子得以与核小体中相应的顺式作用原件结合,同时募集相应反式作用因子,启动基因转录。那些组蛋白乙酰化程度密集的区域,其下游的DNA浮现出非常活泼的转录状况。然而目前尚不懂得干细胞进入特定的微环境当前,是否也通过其特定基因的组蛋白润饰,实现其在该环境下从新编程并产生与环境细胞相类似的适应性。骨髓间充质干细胞(bonemesenchymalstemcells,BMSCs)是一小群存在于骨髓中的非造血细胞,它存在增殖跟多向分化潜能。BMSCs存在取材便利、扩增敏捷、可自体移植等特点,因此,将其作为种子细胞用于细胞医治已成为当前研究的热点。本实验取材于雌性SD大鼠,分辨利用密度梯度离心法跟胶原酶消化法,分别培养了BMSCs跟BSMCs;并模仿盆底环境,应用接触共培养方法树破引诱BMSCs向膀胱平滑肌分化的体外模型,旨在研究BMSCs体外分化为平滑肌过程中,平滑肌相干基因启动子区组蛋白（文章此处忽略..）乙酰化程度是否产生改变,组蛋白乙酰化程度的改变对BMSCs向BSMCs分化的影响。重要实验方法及成果如下：一、细胞培养鉴定及共培养模型的树破1.大鼠BMSCs的分别与培养无菌操作下取下一月龄雌性SD大鼠双侧股骨、胫骨,反复冲刷骨髓腔,混匀冲刷液,离心弃上清后precoll提取所需单核细胞层,参加含10%FBS的DMEM-F12培养液中,置37℃的5%CO2培养箱中培养。所得贴壁细胞,流式细胞仪检测其分子表型。成果：成功分别出状况为梭形的骨髓单核细胞,其分子表型为：CD31、CD45阴性、CD29、CD44、CD166阳性。2.大鼠BSMCs的分别与培养无菌前提下取一月龄雌性SD大鼠膀胱,采取胶原酶消化法分别单个核细胞,含10%FBS的HG-DMEM培养,获得贴壁细胞,免疫荧光法鉴定其标记蛋白的表白。成果：平滑肌特异性的a-SMA,Calponin跟SM-MHC表白阳性。3.树破大鼠BSMCs引诱BMSCs分化的体外共培养模型以吊挂式细胞培养小室transwell底层的多孔膜(1um)作为BMSCs跟BSMCs之间的间隔,将BMSCs跟BSMCs分辨接种于多孔膜两侧作为实验组,未经过接触共培养的同批次BMSCs作为（略..）对比组。取下接触共培养3日后BMSCs,RT-PCR检测其与对比组成肌分化平滑肌标记性蛋白。成果：RT-PCR显示接触共培养组较对比组的BMSCs中平滑肌标记性蛋白的表白量明显增加,提示BMSCs在接触共培养体系中成肌分化,建模成功。二、组蛋白乙酰化对BMSCs向BSMCs分化的影响1.ChIP、qPCR分析平滑肌标记性基因启动子区组蛋白乙酰化程度对BMSCs向平滑肌分化的影响实验采取ChIP技巧,在活细胞状况下甲醛固定共培养前后BMSCs中蛋白质-DNA复合物,超声打断染色质片段,调剂片段大小在200-1000bp,而后通过抗组蛋白特定乙酰化位点H3K9抗体积淀分化前后BMSCs基因组,定量PCR扩增BMSCs中平滑肌标记性基因启动子区DNA片段,懂得干细胞分化前后启动子区域乙酰化程度的变更情况,从而获得蛋白质与DNA彼此作用的信息。成果：共培养引诱分化后,BMSCs平滑肌标记性基因启动子区乙酰化程度较未分化前明显增加,启动子区域DNA的乙酰化促进了BMSCs向BSMCs分化。2、组蛋白去乙酰化酶克制剂(HDACi)丁酸钠对BMSCs分化的影响将二代BSMCs种植于吊挂式细胞培养（文章此处忽略..）小室transwell下室面,培养箱中培养6h后翻转transwell将其放回含平滑肌培养液的六孔板中持续培养。次日将BMSCs种植于膜内面。分组标记,实验组上室内参加含3.0mmol/L丁酸钠的BMSCs培养液,对比组参加个别BMSCs培养液,分辨取下培养1、2、3天BMSCs,细胞免疫荧光、qPCR分析不同时光段BMSCs向BSMCs分化的情况。成果：HDACi丁酸钠可能加强骨髓间充质干细胞向平滑肌的分化才能,进步组蛋白乙酰化程度可能促进BMSCs分化。论断：本研究成功分别出BMSCs及BSMCs,并模仿体内环境树破了引诱分化模型,在该模型的基本上研究组蛋白乙酰化对BMSCs分化才能的影响。研究表明,干细胞分化后目标基因启动子区域存在乙酰化程度的明显进步；增加间充质干细胞分化环境中的乙酰化程度也能大大进步干细胞分化的才能。本研究深刻摸索组蛋白润饰在骨髓间充质干细胞分化过程中的调控机制,为BMSCs移植医治压力性尿失禁的研究奠定基本。

以上为本篇毕业论文范文组蛋白乙酰化对骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化的调控作用及机的介绍部分。

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