MODY2和MODY3相关DNA突变位点检测集成芯片的建立

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MODY2和MODY3相关DNA突变位点检测集成芯片的建立

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MODY2和MODY3相关DNA突变位点检测集成芯片的建立毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的青年人中成年起病型糖尿病(maturity-onsetdiabetesoftheyoung,MODY)是一种高度异质性的单基因突变常染色体显性遗传疾病,属于特殊类型的糖尿病。由于其早期症状的非典型的,曾被归类于2型糖尿病,约占2型糖尿病的2%～5%。实际工作中该病只能依靠临床表现及家系调查进行诊断,缺乏基因学诊断依据。至今已发现6种不同的基因突变导致MODY,其中MODY2和MODY3较多见,而其他类型较罕见。据GenBank数据库报道,MODY（略..）2相关葡萄糖激酶(glucokinase,GCK)基因和MODY3相关肝细胞核因子(HNF)-1α基因的DNA突变数量逐年增多。因此,本研究基于国内和香港地区报道的MODY2和MODY3已知华裔汉族人群突变位点,研制一种基于PCR-序列特异寡核苷酸探针法(PCR-SSOP)原理的微阵列芯片,结合多重不对称PCR(MAP)方法,用于GCK(MODY2)基因和HNF-1α(MODY3)基因已知华裔汉族人群13个突变位点的集成检测。方法收集6个临床高度怀疑MODY的患者及其亲属(共（略..）计35人)和10例健康对照者的临床资料和血标本,抽提DNA;根据GCK基因和HNF-1α基因已知华裔汉族人群突变位点设计13对等位基因位点特异性的寡核苷酸探针,将探针固定在N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)修饰的载玻片表面;针对所提DNA以多重不对称PCR(multiplexasymmetricPCR,MAP)方法制备Cy5(花青素5)荧光标记靶基因并与芯片杂交,扫描杂交结果,通过分析杂交信号进行检测;利用普通PCR法扩增相应目的基因片断,产物纯化后直接DNA测序;（略..）最后将测序结果与杂交结果相对比。结果利用此芯片对6个临床高度怀疑MODY的患者及其亲属(35人,家系1～6)和10例健康对照进行筛查。结果发现:家系5患者存在GCK基因IVS6nt+37T→C纯合突变,其父亲及女儿存在该位点杂合突变,结合该家系临床表现,考虑患者MODY2诊断明确;家系3患者及其父兄存在HNF-1α基因IVS2nt-23C→T杂合突变,结合其临床表现,考虑该突变与家系中糖尿病的早期发病相关联;其余家系和健康对照组均未发现13种相关DNA突变。芯片检测与D（略..）NA测序结果完全一致。结论结果表明,这种寡核苷酸芯片可以对MODY2和MODY3已知华裔汉族人群突变位点进行同步快速检测,具有较高的灵敏度和实用性,对临床明确诊断有很大指导意义。这一模式的基因芯片经过不断改进后也可用于MODY其他类型的诊断及其他单基因突变人类疾病的基因鉴定诊断。

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