激光微切割与定量PCR技术分析肾脏病理切片及肾小球RNA

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激光微切割与定量PCR技术分析肾脏病理切片及肾小球RNA

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毕业论文范文题目：激光微切割与定量PCR技术分析肾脏病理切片及肾小球RNA，论文范文关键词：激光微切割与定量PCR技术分析肾脏病理切片及肾小球RNA
激光微切割与定量PCR技术分析肾脏病理切片及肾小球RNA毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的：肾脏病理切片是肾脏疾病研究的重要方法之一。分析肾脏病理切片及其特异性组份如肾小球中的基因水平，可以为研究肾脏疾病发病机制提供重要的实验基础。然而，成功提取病理切片及肾小球中的RNA是研究切片中基因水平的基础。本课题利用激光微切割技术和定量PCR技术，定位和定量的检测了不同提取方法和不同固定剂对肾脏病理切片及肾小球中RNA的作用。方法：选用6只3月龄体重为250gWistar大鼠，取其肾脏，用于制作冰冻切片和石蜡切片。采用丙酮、甲醇-氯仿-冰醋酸(Methacam)、lO％中性福尔马林三种固定剂分别固定（略..）组织，以制作三种不同的石蜡切片；做好的三种不同石蜡切片，采用RNA裂解液、TrizolAgent2种方法提取其中的RNA，逆转录为cDNA，使用普通PCR扩增100bp纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)基因，180bp磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)和565bpBeta-肌动蛋白以分析RNA质量。采用SYBRGREEN1定量PCR方法扩增87bpGAPDH分析RNA的含量。用70％乙醇、丙酮、甲醇、4％多聚甲醛固定冰冻切片，使用激光微切割技术切取肾小球，用异硫氰酸胍GTC)方法和TrizolAgent方法提取RNA，采用Taqman探针（略..）定量PCR检测GAPDH基因以分析RNA含量；选取丙酮固定的石蜡切片和冰冻切片，使用激光微切割技术切取肾小球，采用RNA裂解液提取石蜡切片中RNA，采用GTC提取冰冻切片的RNA，使用Taqman定量PCR方法检测GAPDH，比较石蜡切片和冰冻切片中RNA含量。结果：对于石蜡切片，我们经两种方法提取的RNA均可经RT-PCR扩增出180bp大鼠磷酸甘油醛脱氢酶(G3PDH)、565bpβ-肌动蛋白(β-ACTIN)及100bpPAI-1基因；定量PCR检测GAPDH结果显示：采用RNA裂解液时，三种固定方法固定的切片之间R（文章此处忽略..）NA含量相似，且提取的RNA含量均高于Trizol方法；采用Trizol方法提取时，沉淀性固定剂丙酮的RNA产量最高，methacarn方法次之，中性福尔马林方法提取的效果最差。对于冰冻切片中的肾小球，用沉淀性固定剂如乙醇、丙酮、甲醇方法固定切片、提取RNA时，两种提取方法和三种固定方法对RNA含量的影响都无明显差异；但在提取4％多聚甲醛固定的切片中肾小球RNA时，使用Trizol提取RNA含量明显高于使用GTC方法，且其含量与沉淀性固定剂固定的切片RNA含量无明显差异，而用GTC方法提取量较少（略..）。通过激光微切割技术，切取石蜡切片与冰冻切片中肾小球，两者中RNA含量之间无明显差异。结论：我们认为，不论是石蜡切片还是冰冻切片，在RNA提取量的方面，根据固定方法选择合理的RNA提取方法更重要。在本课题中我们成功的提取了病理切片中的RNA，利用激光微切割和定量PCR的方法，对不同的病理切片及肾小球中的RNA进行分析，最终提供了从肾脏病理切片及肾小球中提取RNA并检测其基因水平的一些有用实验数据。

以上为本篇毕业论文范文激光微切割与定量PCR技术分析肾脏病理切片及肾小球RNA的介绍部分。

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