马感染性贫血病病毒L株前病毒全基因组克隆及序列分析

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马感染性贫血病病毒L株前病毒全基因组克隆及序列分析

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毕业论文范文题目：马感染性贫血病病毒L株前病毒全基因组克隆及序列分析，论文范文关键词：马感染性贫血病病毒L株前病毒全基因组克隆及序列分析
马感染性贫血病病毒L株前病毒全基因组克隆及序列分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：马感染性贫血病病毒（Equineinfectiousanemiavirus，EIAV）是马感染性贫血病（Equineinfectiousanemia，EIA）的病原。它与人免疫缺点病毒（Humanimmunodeficiencyvirus，HIV）同属于反转录病毒科慢病毒属，二者在病毒状况、基因组构造、遗传性、抗原性、细胞嗜性、变异性等方面都极为类似，因此，EIAV可作为研究HIV分子致病机理的动物模型。我国的EIAV弱毒疫苗是迄今为止世界上独一投入利用的慢病毒疫苗，成功地把持了我国EIA的风行。该毒株是由EIAVL株（EIAVL）通过驴体传代，使其毒力明显加强，而后在驴白细胞培养物上持续传代致弱获得的。为揭示我国马传贫弱毒疫苗毒力致弱的分子机制，为HIV及其余慢病毒疫苗的设计跟研究提供有价值的实际根据，在已测得马传贫驴强毒（Donkey-a（文章此处忽略..）daptedequineinfectiousanemiavirus，DA-EIAV）及驴白细胞弱毒（Donkeyleukocyteattenuatedequineinfectiousanemiavirus，DLA-EIAV）全序列的基本上，咱们对EIAVL株前病毒进行了全基因组克隆跟序列测定。本研究以EIAVL株感染马的外周血液白细胞DNA为模板，利用PCR技巧，分四个片段扩增EIAVL株前病毒DNA，并分辨克隆到载体质粒pBluescriptSK中，再经亚克隆终极得到EIAVL株前病毒全基因克隆pLV。该前病毒基因组全长8235bp，其中G+C含量为38％。基因组两端是长为316bp的LTR，其中U3区长为197bp，R区为80bp，U5区为39bp。前病毒基因组有三个较长的开放浏览框架（ORF），分辨是gag、pol跟env基因。gag基因位于713-1912位碱基之间，全长1200bp；pol（本文此处忽略..）基因位于1708-5109位碱基之间，全长3402bp；env基因位于5305-7896位碱基之间，长2592bp。此外前病毒还有三个小的ORF，S1位于5113-5265位碱基之间，长153bp，S2位于5279-5482位碱基之间，长204bp，S3位于7245-7646位碱基之间，长402bp。通过利用打算机软件DNAsis分析，EIAVL株与DA-EIAV跟DLA-EIAV序列同源性分辨为98.4％跟96.9％。同源性如此濒临反应了它们之间的亲缘关联，另外EIAVL株与DA-EIAV的同源性高于其与DLA-EIAV的同源性，这合乎DLA-EIAV的衍生过程。EIAVL株与国外已发表的一些相干毒株比拟核苷酸序列差别很大，同源性只有79％，RTase的氨基酸同源率只有86％，Gag蛋白的同源率只有79％，阐明EIAVL株与国外已报道的多少个EIAV毒株的亲缘关联较远。只管EIAVL、DA-EIAV及DLA-EIAV毒株与国外的多少株EIAV病毒差别很大，然而在EIAV生命周期中起（此处忽略..）重要作用的多少个已知功能区是保守的。P9的YXXL基序、P11的两个锌指构造以及大多数反转录病毒蛋白酶中均存在的N端D-T-G基序跟C端的L/I-G-R-D/N基序在所有的毒株中都是一致的；各毒株Gp90有六个N-连接糖化位点地位高度保守；Gp45有四个N-连接糖化位点在所有毒株中均是保守的，并且在免疫决定区内对保持Gp45构象起重要作用的两个Cys在所有毒株中的地位是保守的；Tat蛋白中起转录激活作用的核心区在各毒株中完全一致，基本区中对与TAR结合所必须的Glu在各毒株中的地位也完全保守；Rev蛋白的基本区在各毒株之间也很保守。这些保守区确切破，为进一步研究EIAV的构造与功能提供了极有价值的信息。刘红全槽要20（）年5月EIAVL株的pOI基因在重叠区不起始码ATG，DA－EIAV、DLA－EIAV株也是如此；对EIAV各毒株omol重叠区5’端分析表明，都存在（本文此处忽略..）一个保守的茎－环构造，进一步证明了EIAVP。1的翻译机制为移框浏览。TAR是Tat蛋白的反式激活应答区。通过对EIAVL株及相干毒株进行比较，只有DLA－EIAV株TAR茎的起始部位产生了改变，这可能影响到转录的效力，并使其毒力减弱。总之，本研究首次克隆了我国EIAVL株前病毒全基因组，测定了EIAVL基因组核苔酸全序列，并对EIAVL、DA－EIAV、DLA－EIAV及国外相干的EIAV毒株进行了比较分析，为揭示我国马传贫弱毒疫苗毒力致弱的分子机制奠定了重要的分子生物学基本，进一步丰富了慢病毒的基本实际研究。

以上为本篇毕业论文范文马感染性贫血病病毒L株前病毒全基因组克隆及序列分析的介绍部分。

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