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松材线虫携带的荧光假单胞菌GcM5-1A过氧化物酶的研究

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毕业论文范文题目:松材线虫携带的荧光假单胞菌GcM5-1A过氧化物酶的研究,论文范文关键词:松材线虫携带的荧光假单胞菌GcM5-1A过氧化物酶的研究
松材线虫携带的荧光假单胞菌GcM5-1A过氧化物酶的研究毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:松材线虫病(Pinewiltdisease,PWD)重要通过松褐天牛为宿主传播,是由松褐天牛携带的松材线虫(Bursaphelenchusxyluphilus)引起的一种松树覆灭性感染疾病。PWD可能对多种松属的动物造成迫害。因为松材线虫病的产生跟发展过程中波及到松树寄主、媒介昆虫、松材线虫、相干的微生物以及环境前提等多种因素,而这些因素之间构成了复杂的关联,所以给该病的致病机理研究以及防治工作造成了难度。本实验研究了松材线虫携带的荧(本文此处忽略..)光假单胞菌GcM5-1A的培养液经硫酸铵分级积淀后各组分中木质素过氧化物酶(LiP)的活性及各组分对黑松悬浮细胞的毒性。本文还对GcM5-1A菌株胞外LiP进行了初步纯化,并对纯化后的酶学性质进行了研究。成果表明:LiP活性重要呈当初50%-70%积淀组分中;除了0-20%积淀组分,50-70%积淀组分对黑松悬浮细胞的毒性也很强。GcM5-1A菌株培养液经硫酸铵分级积淀以及DEAE-SepharoseFF两步纯化后,其LiP的比活力从0.81U/mg进步到21.30U/mg。其最适温度(略..)为35℃,最适pH为4.0。在15-35℃、pH6.0-9.0范畴内,酶活保持绝对牢固。NH2OH.HCl跟KCN对酶活的克制造用分辨达到88%跟57%,而NaN3对酶活的克制造用只有15%左右。接收光谱显示该酶在406nm处有一个Soret峰,参加1mmol/LNa2S2O4后,吸光度呈现了明显的降落,但Soret峰不明显挪动。另外,咱们构建了荧光假单胞菌GcM5-1A菌株的基因组文库,并且通过生物活性测定的方法从文库中筛选出一个产毒素的转化子。咱们对核苷酸序列进行了测定,成果表明该序列(此处忽略..)含一个1290bp的开放读框。信号分析软件揣测N末端有一个36个氨基酸的信号肽。同源性分析显示,毒素基因的核苷酸序列与P.fluorescensSBW25的PFLU2919基因,P.fluorescensPf-5的Dyp类型过氧化物酶家族基因以及P.fluorescensPf0-1的Tat转移酶分辨有83%,82%跟80%的类似性。咱们分辨克隆了编码全长蛋白的基因跟去掉信号肽的基因,并在E.coliBL21中进行了可溶性表白、摸索了目标蛋白最适引诱表白前提。通过Ni2+亲跟层析的(此处忽略..)方法得到了纯化的全长以及去掉信号肽的重组蛋白。生测成果表明全长以及去掉信号肽的重组蛋白都对黑松的悬浮细胞显示了毒性。HPLC分析显示,参加全长重组蛋白跟过氧化氢的黑松松枝提取物组分产生了明显的变更,这阐明此种毒素蛋白可能是一种过氧化物酶。


以上为本篇毕业论文范文松材线虫携带的荧光假单胞菌GcM5-1A过氧化物酶的研究的介绍部分。
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