鸡感染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其免疫学特点分析

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鸡感染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其免疫学特点分析

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毕业论文范文题目：鸡感染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其免疫学特点分析，论文范文关键词：鸡感染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其免疫学特点分析
鸡感染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其免疫学特点分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：鸡感染性支气管炎病毒(InfectiousBronchitisVirus,IBV)是冠状病毒科、冠状病毒属γ冠状病毒的代表成员。IBV感染可引起鸡群典范的呼吸道症状:喘气,咳嗽,打喷嚏,气管罗音跟流鼻涕。迄今为止,世界范畴内已经分别出了超过30种血清型的IBV变种,它们之间只有很少或者基本不穿插保护力,这也是IBV难以把持的重要起因。通过杂交瘤技巧制备针对IBV的单克隆抗体有助于树破疾病的疾速诊断方法,加强疾病的防控。实验首先用一对特异性引物将IB（略..）VN蛋白基因从质粒模板上扩增出来,而后将其连接到表白载体pET-30a上,构建重组质粒pET-30a-N并将其转入大肠杆菌中引诱表白。SDS-PAGE分析,表白的重组N蛋白呈现两条目标条带,大小分辨为:60kDa跟49kDa。用Ni-NTA纯化体系纯化重组N蛋白后将其转印至NC膜上,用鼠抗IBV阳性血清与其作用检测其抗原性,成果显示重组蛋白抗原性良好。同时引诱表白重组M蛋白,将其纯化后放入-70℃保存。用鸡感染性支气管炎病毒tl/CH/LDT3/03皮下多点免疫6-8周（本文此处忽略..）龄雌性BALB/c小鼠,待其产生足够的免疫力后,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。分辨用重组M、N蛋白包被ELISA板筛选阳性杂交瘤细胞,经过三次克隆得到两株杂交瘤细胞,命名为3G11、4F10。经鉴定,单克隆抗体3G11重链亚类为IgG1,轻链为κ链;单克隆抗体4F10重链亚类为IgG2b,轻链为κ链。ELISA及westernblot显示单克隆抗体3G11可能特异性辨认M蛋白,单克隆抗体4F10可能特异性辨认N蛋白。两株单克隆抗体都可能与选取的不同IBV毒株反应,表明它们所针（本文此处忽略..）对的表位可能位于蛋白的保守区。为了进一步断定两株单克隆抗体所针对的表位区域,实验分辨引诱表白了截短的M蛋白:MP3-1(99-172aa)、MP3-2(161-225aa)跟截短N蛋白:GST-N(11-99aa)、GST-N(281-160aa)、GST-N3(145-255aa)、GST-N4(236-321aa)、GST-N5(303-409aa)。Westernblot跟ELISA均显示单克隆抗体3G11可能与HIS-M、MP3-1反应,与MP3-2、GST均不反应,阐明了单克隆抗体3G11表位区域位于M蛋白的99-172位氨基酸;单克隆抗体4F10可能与GST-N3反应,而与GST-N（本文此处忽略..）1、GST-N2、GST-N4、GST-N5及GST阴性对比不反应,阐明单克隆抗体4F10所针对的表位区域位于N蛋白的145-255位氨基酸。本研究对IBV新的诊断方法的树破及疫苗研制存在重要意思。

以上为本篇毕业论文范文鸡感染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其免疫学特点分析的介绍部分。

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