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感染性法氏囊病病毒VP2基因的分子特点、表白与利用

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毕业论文范文题目:感染性法氏囊病病毒VP2基因的分子特点、表白与利用,论文范文关键词:感染性法氏囊病病毒VP2基因的分子特点、表白与利用
感染性法氏囊病病毒VP2基因的分子特点、表白与利用毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:感染性法氏囊病(InfectiousBursalDisease,IBD)是由感染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus,IBDV)引起的以侵害雏鸡淋巴组织,特别是中枢免疫器官—法氏囊为重要特点的感染病。该病不仅引起患病动物逝世亡,而且还导致机体免疫克制,使机体的免疫防备才能降落跟疫苗免疫接种失败,对易感鸡群履行疫苗接种是防备该病最有效的方法,但因为各地风行的IBDV毒株的毒力与抗原性的差别,给疫苗毒株的抉择造成较大的艰苦,每年因为IBD免疫失败或免疫克制造成的经济丧失宏大。为了抵抗超强毒的攻打以及母源抗体的烦扰,目前广泛利用中等毒力的IBD活疫苗,给IBD的防控带来极大的隐患,灭活疫苗存在着抗原制备的艰苦。鉴于此,进一步分析当前IBDV的分子风行病学、研制新型的基因工程疫苗,还是当前禽病防控工作中亟待解决的重要课题。本文对近期风行毒株IBDV的重要(本文此处忽略..)保护性抗原VP2基因的分子特点进行了分析,利用杆状病毒表白体系表白了重组VP2蛋白,并进行了初步利用研究,为IBDV的诊断跟防控提供了科学根据跟技巧支撑。研究内容包含三个部分:实验1:近期引起免疫失败的感染性法氏囊病病毒VP2基因的分子特点用RT-PCR方法从2007年12月在安徽境内产生的两起感染性法氏囊病(IBD)免疫防备失败的病鸡法氏囊组织AH1与AH2中扩增感染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因。序列分析,AH1与AH2病毒VP2基因长度均为1350nt,编码450aa,七肽基序均为SWSASGS,在222、253、256、279、284、294跟299位上的氨基酸残基分辨是A、Q、I、D、A、I跟S,存在IBDV强毒的分子特点,用AH1跟AH2感染20日龄雏鸡,产生明显IBD病变,逝世亡率为25%(1/4)。同源性分析,26个血清Ⅰ型IBDV毒株VP2基因核苷酸跟氨基酸序列的同源性分辨为90.7%-99.6%跟95.5%-100.0%,其中,15个中国IBDV毒株的核苷酸跟氨基酸序列同源性分辨在97.5%-99.7%、98.6%-100.0%,血清Ⅰ跟Ⅱ(此处忽略..)型IBDV毒株之间核苷酸跟氨基酸序列的同源性则分辨小于78.6%跟83.0%。不同IBDV毒株VP2基因的七肽基序、特点性氨基酸残基以及高变区的亲水性有差别。在进化树上,26个血清Ⅰ型IIBDV毒株可分为数组,其中的15个中国分别IBDV毒株不在同组,毒株之间的亲缘关联与分别地区或分别时光不明显的接洽。AH1跟AH2与现行商品疫苗毒株B87的VP2基因核苷酸序列差别率分辨为5.3%跟5.2%;氨基酸序列差别率分辨为4.0%跟3.4%,这也进一步佐证了IBDV野毒VP2基因变异所引起的毒力变更跟VP2抗原表位的漂移是导致当前IBD疫苗免疫防备失败的重要起因。本文对意识当前IBDV的风行跟变异现状存在参考价值,为新型IBDV野毒致病性跟变异简便定性检测方法摸索了一条新道路。实验2:感染性法氏囊病病毒VP2基因在昆虫细胞中的表白将2007年12月从安徽境内产生的IBD免疫防备失败的病鸡法氏囊组织中克隆的IBDVVP2基因插入到pFastBacl供体质粒中,转化(略..)E.coliDH10Bac感触态细胞,经三抗性筛选,获得重组杆状病毒表白质粒rBac-VP2,用脂质体法转染Sf9细胞。对rBac-VP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光实验(IFA)检测,存在特异性荧光;用免疫印迹(Western-blotting)分析,在50kD处呈现一条特异蛋白条带;电镜察看,重组VP2蛋白可能自组装成病毒样颗粒。本实验为研制针对近期风行IBDV的新型病毒样颗粒疫苗跟新型检测试剂奠定了基本。实验3:感染性法氏囊病病毒VP2基因在昆虫细胞中的融合表白与利用将2007年12月从安徽境内产生的IBD免疫防备失败的病鸡法氏囊组织中克隆的BDVVP2基因定向克隆入杆状病毒表白体系的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化E.coliDH10Bac感触态,筛选重组杆状病毒表白质粒rBacA-VP2。用rBacA-VP2转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。对重组杆状病毒感(此处忽略..)染的Sf9细胞,用间接免疫荧光实验(IFA)检测,存在特异性荧光;用BDV抗体夹心ELISA检测,呈阳性反应,抗原效价达到102;用免疫印迹(Western-blotting)分析,在53kD处呈现一条特异蛋白条带;电镜察看,重组VP2蛋白可能自组装成病毒样颗粒。用HisTrapHP亲跟层析柱纯化的重组VP2蛋白作为包被抗原,树破了IBDV抗体间接ELISA检测方法。本研究为进一步研究IBD新型病毒样颗粒疫苗跟抗体检测试剂奠定了基本。


以上为本篇毕业论文范文感染性法氏囊病病毒VP2基因的分子特点、表白与利用的介绍部分。
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