树破HCLV荧光定量PCR检测技巧跟NDV HB92株基因组序列测定及分析

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树破HCLV荧光定量PCR检测技巧跟NDV HB92株基因组序列测定及分析

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树破HCLV荧光定量PCR检测技巧跟NDV HB92株基因组序列测定及分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：猪瘟是由猪瘟病毒(ClassicalSwineFeverVirus，CSFV)引起的猪的一种高度接触性感染病，给养猪业造成重大的经济丧失。目前，疫苗接种是防备猪瘟的重要手段。中国猪瘟兔化弱毒苗(HogCholeraLapinizedVirus，HCLV)以其存在诱生免疫反应快，对种猪、乳猪无残余毒力，免疫猪可抵抗猪瘟强毒株的攻打等特点，成为国际上公认的最保险有效的弱毒疫苗。多年来，在国内外被广泛利用，对猪瘟的把持起到了重要的作用。疫苗效价的高低是疫苗品质合格与否的关键指标。HCLV在细胞中的增殖力较弱，不产生致细胞病变，出产上对其效价的测定始终沿用兔体定型热反应法。但该法存在的凸起不足是：不能准断定量；测毒成果易受兔体个体差别跟气象前提影响；实验周期长、费时费劲。本研究在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株的5’非编码区设计（文章此处忽略..）一对引物跟一条荧光探针，将荧光定量PCR(FluorogenicQuantitativePCR，FQ-PCR)技巧跟LightCycler定量检测体系相结合，用于猪瘟兔化弱毒疫苗的定量检测，通过优化打算，反复实验，以及与传统兔热法进行比较，首次树破了定量检测猪瘟兔化弱毒苗方法。研究成果表明，该方法的灵敏度为每个反应10~2拷贝数，每反应体系检测浓度的线性范畴为10~7-10~2，达6个数量级；标准样品的变异系数为2.3％-5.1％(n=10)，疫苗样品组内实验变异系数为0.85％-2.8％(n=5)、组间实验为2.5％-7.3％(n=5)，对同一样品分5次RNA提取跟逆转录，其变异系数为5.0％；对9份疫苗样品进行了定量检测，与兔体定型热反应方法比拟较，有很好的相干性；定量检测不到1小时，加上样品的处理、RNA提取跟逆转录，全部检测过程仅需4小明一。该方法克服了传统兔体定型热反应法（文章此处忽略..）的不足，可望代替兔体定型热反应法用于疫苗出产过程中的效价测定并领导疫苗的配制，也为猪瘟病毒的生物学研究提供了一种新的、简捷有效的工具。摘要2:鸡新城疫困eweastledisease，ND)是由新城疫病毒伽eweastlediseasevirus，NDV)引起的一种重要侵害鸟类，特别是鸡的一种重大的感染病，该病呈世界范畴内分布并给养禽业带来宏大的丧失。筛选无毒耐热疫苗株在ND的防制中存在重要的作用。HB92株以天然无毒株V4为亲本株经耐热选育跟蚀斑纯化获得的变异株，该株存在无毒耐热跟免疫保护性好的特点。本研究以HB92株为材料，以Bl株全序列为参照，设计8对引物，用RT一PCR方法，扩增出该8个片段，克隆进pGEM一T载体并对其序列进行了测定，最后根据各个克隆的序列重叠部分拼接出全基因组序列并对该序列进行了比较跟体系进化（文章此处忽略..）分析。成果显示，HB92株基因组全长15186bP，其3’弓!导序列长55bP，5’拖尾序列长114bp，有6个大的开放浏览框(ORF)，分辨编码NP、P、M、F、HN跟L蛋白。与GenBank登录的3株NDV毒株全序列比拟，HB92与弱毒株Bl、LaSota核营酸同源性均为94%，与强毒株ZJI核普酸同源性为83.9%。以无毒株、弱毒株、中毒株跟强毒株为参考，将HB92的各基因的核营酸序列跟揣测的蛋白质氨基酸序列与这些株进行了同源性比较，对NP、P、F、11N基因，HB92株与弱毒株跟中毒株的序列同源性较高，而与无毒亲本株V4序列差别绝对较大;对M、L基因，HB92株与各株的序列同源性差别不大。从F蛋白裂解序列看，HB92与弱毒株的一致而与V4有一个氨基酸的差别，但都还是弱毒力型毒株的序列特点;从HN蛋白氨基酸残基的数量来看，HB92为577，与弱毒株的一致，HB92株HN糖基化位点的地位也（文章此处忽略..）与弱毒株较一致，而与V4的不同。以NP、P、F跟HN蛋自氨基酸序列为基本的体系进化分析成果也显示HB92与弱毒跟中毒株遗传间隔比与其亲本株V4的更近;以M蛋白氨基酸序列为基本的体系进化成果显示出NDV毒力与遗传间隔间有较好的相干性。从以上成果可知，HB92株固然是无毒株，但在部分基因序列特点上与弱毒株跟中毒株的更濒临，而与V4有较大的差别，在该疫苗的出产利用中应当考虑其毒力返强可能性;NDV的毒力不是由某一个基因决定的，而是由多个基因协同作用的成果:决定HB92株耐热性的基因还需进一步研究。

以上为本篇毕业论文范文树破HCLV荧光定量PCR检测技巧跟NDV HB92株基因组序列测定及分析的介绍部分。

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