牛感染性鼻气管炎病毒gG缺失株构建及gG单克隆抗体系备

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牛感染性鼻气管炎病毒gG缺失株构建及gG单克隆抗体系备

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牛感染性鼻气管炎病毒gG缺失株构建及gG单克隆抗体系备毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：牛感染性鼻气管炎(InfectiousBovineRhinotracheitis,IBR),是由牛感染性鼻气管炎病毒(InfectiousBovineRrhinotracheitisviruses,IBRV)引起的一种牛的以上呼吸道炎症为主的急性、热性、接触性感染病,临床表示多种多样,以鼻气管炎、眼结膜炎、高热、流产、感染性脓疱为重要特点。该病在世界范畴内风（本文此处忽略..）行,并且每年都给养牛业造成宏大的经济丧失,鉴于传统疫苗存在的弊病及该病毒的特点,近年来对活病毒疫苗的研究受到了更大的关注。本研究构建了一株牛感染性鼻气管炎病毒gG基因缺失的重组病毒,为研究活病毒疫苗及构建表白外源基因的IBRV重组病毒活载体疫苗奠定基本。同时制备了牛感染性鼻气管炎病毒gG蛋白单克隆抗体,为树破能辨别缺失病毒与野生病毒的分子辨别诊断方法（此处忽略..）提供了材料。论文重要成果简述如下:1.牛感染性鼻气管炎病毒gG基因缺失渐变株的构建本实验根据牛感染性鼻气管炎病毒全基因组序列(基因登陆号为AJ004801)设计引物,用PCR分辨扩增gG基因上游跟下游约1.0kb跟0.8kb的片段作为同源重组臂,用相应的限度性内切酶将其顺次定向克隆于载体pcDNA3.1(+)myc-HisB中,而后插入EGFP报告基因,构建成重组转移质粒,并命名为p（此处忽略..）cDNA3.1-ZYP。以脂质体转染法将经线性化的pcDNA3.1-ZYP、质粒pBICP0与IBRV基因组DNA在牛肾细胞(MDBK)上共转染,成功的进行了同源重组,有待进行IBRVgG~-/EGFP~+渐变株的筛选跟纯化。2.抗牛感染性鼻气管炎病毒gG蛋白单克隆抗体的制备用纯化的IBRV为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELI（略..）SA方法筛选跟有限稀释法三次克隆获得一株分泌抗IBRV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,命名为E12。免疫荧光实验证明此单抗能特异性地与IBRV反应,用小鼠腹水出产的McAb的ELISA效价为1:3200。此单克隆抗体可能用于IBRV的检测,同时为我国牛感染性鼻气管炎铲除打算提供工具。

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