耐黄龙病寄主动物RGA的分别鉴定及侵染相干序列的表白分析

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耐黄龙病寄主动物RGA的分别鉴定及侵染相干序列的表白分析

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毕业论文范文题目：耐黄龙病寄主动物RGA的分别鉴定及侵染相干序列的表白分析，论文范文关键词：耐黄龙病寄主动物RGA的分别鉴定及侵染相干序列的表白分析
耐黄龙病寄主动物RGA的分别鉴定及侵染相干序列的表白分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：柑桔黄龙病(Huanglongbing,HLB)是影响寰球柑桔产业的一种覆灭性病害,会造成柑桔叶片斑驳、黄化,导致柑桔减产直至植株逝世亡。该病原菌至今未能得到牢固的纯培养,因此对其防治方法也受到极大的限度,目前尚未有有效的杀菌制剂,一旦发明病株就只能通过铲除并焚烧病树的方法来禁止黄龙病的感染。利用抗病品种存在的某些特点来进步动物抗病性是动物病害防治的重要办法。柑橘黄龙病菌的寄主包含芸香科的多种动物跟其余科属的动物,然而不同的动物品种对病害的感病性有着明显的差别,因此利用感病性弱甚至是有耐病特点的动物分别其中抗病相干的基因进行抗病育种,对黄龙病这一类迫害极大、防治艰苦的病害尤其存在重要意思。进行抗病育种研究首先须要存在抗病种质资源或抗病基因,现有的柑桔品种中存在抗病特点的资源非常有限,从亲缘关联较（此处忽略..）近的动物属或科中得到相应的抗病相干基因是进行抗病育种的可行办法。跟着分子生物学技巧的始终发展,已通过图位克隆法、转座子标签法等方法分别鉴定到一些动物抗性基因,本研究的目标等于从抗(耐)柑桔黄龙芸香科动物中克隆抗病基因同源序列,为柑桔黄龙病的抗病育种提供一些基本材料。本论文的研究内容包含:(1)根据已知动物抗性基因表白产物的保守区域核苷酸结合位点(nucleotidebindingsite,NBS)设计简并引物,以田间对黄龙病存在耐病特点的芸香科寄主动物九里香跟柚的基因组DNA为模板,PCR扩增其抗病基因同源序列(Resistancegeneanalogs,RGAs),并对获得的序列进行生物信息学分析,揭示不同寄主动物抗病基因的多样性及进化关联;(2)以耐黄龙病的柑桔属动物柚的cDNA为模板,PCR扩增RGAs,进行（此处忽略..）克隆测序,根据测序成果设计特异性引物,通过实时荧光定量PCR对RGA在甜橙嫁接HLB后的持续八次采样中的表白进行实时定量分析。重要的研究成果有:根据已知动物抗性基因蛋白NBS保守构造域引用设计的5条简并引物,随机组合成六对引物以九里香跟柚的基因组DNA为模板进行PCR扩增,通过RFLP分析跟克隆测序,共获得43个抗性基因同源序列(Resistancegeneanalogs,RGAs)。NCBI序列比对成果显示43个片段与已有报道的抗性基因及已克隆的抗性基因同源序列存在不同程度的同源性,其中有12个RGAs能翻译成完全持续的氨基酸序列。通过Clustalx、DNAMAN等软件分析RGAs及其推导的氨基酸的同源性,成果显示它们都包含NBS-LRR类抗性基因所存在的保守区域:P-loop、Kinase-2a、GLPL（此处忽略..）AL,其与已克隆的烟草N、亚麻L6、拟南RPS2、RPS5、RPP8、RPM1等多种抗病基因在保守区域氨基酸程度上的同源性为37.39%-43.43%,可望进一步用于HLB抗病基因的分子筛选及遗传图谱的构建。以柚的cDNA为模板进行PCR扩增,RFLP分析后选取6个差别片段送去测序,经测序后通过DNAMAN等软件对序列进行分析后发明,其中有5个片段属于NBS类RGAs,比对成果显示其与7个已知动物R基因的保守构造域相应氨基酸序列同源性为19.71%-42.86%。此外,实验中得到的5条RGAs中,kinase-2a最后一个氨基酸皆为色氨酸,属于non-TIR-NBS-LRR类。对甜橙进行嫁接黄龙病菌的处理后利用实时荧光定量PCR对5个RGAs在HLB侵染过程中的表白进行研究察看,成果显示嫁接黄龙病病芽后的八次采样中5个RGA的表白都有不同程度的变更,初步（此处忽略..）断定与黄龙病的侵染相干。其中,GJ20跟GJ31在实验组第2次采样中表白量大幅回升,而在嫁接病原前后其余月份的表白变更幅度较小,绝对比较牢固;GJ28在实验组第4次采样时表白上调,其余多少个月表白趋于牢固;GJ10在嫁接病原后3个月时表白降落,其余月份与对比组多少乎达到均衡;GJ35在嫁接病原后总体表白较对比组大幅度下调。根据表白情况,进一步揣测GJ20跟GJ31较有可能与HLB菌的相干抗性基因相干。现有研究证明RGA在动物基因组中广泛存在,本研究中得到的序列为果树抗病育种提供了潜在的利用价值。同时,通过病原引诱后RGA的表白情况的研究为HLB相干基因的克隆奠定了必定的基本。

以上为本篇毕业论文范文耐黄龙病寄主动物RGA的分别鉴定及侵染相干序列的表白分析的介绍部分。

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