IBDV地方流行毒株的分离鉴定及生物学特性研究

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IBDV地方流行毒株的分离鉴定及生物学特性研究

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毕业论文范文题目：IBDV地方流行毒株的分离鉴定及生物学特性研究，论文范文关键词：IBDV地方流行毒株的分离鉴定及生物学特性研究
IBDV地方流行毒株的分离鉴定及生物学特性研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：传染性法氏囊病病毒(Infectiousbursaldiseasevirus,IBDV)是引起鸡传染性法氏囊病(Infectiousbursaldisease,IBD)的主要病原体,主要攻击3-12周龄的幼年雏鸡的中枢免疫器官——法氏囊,破坏其中的未成熟的B淋巴细胞及携带有IgM的早期分化的B淋巴细胞,使鸡体内的免疫器官及淋巴滤泡内的B细胞的功能受到严重的破坏,同时还能导致胸腺和脾脏的淋巴组织坏死,引起机体免疫应答低下或者不应答,给养鸡业带来了极大的损失。目前临床上存在着中等偏强毒株、强毒株、超强毒株及变异株等不同致病型的毒株,而不同时期、不同地方分离的IBDV在抗原性、致病性上表现出不同的差异。因此,分离地方IBDV流行毒株,研究流行毒株的分子进化规律及血清型特征,对临床上正确使用疫苗及新型疫苗的研制和建立有效的防治措施有着重大的指导意义。研究对2006-2010年间从广西,湖南及江苏三个省区的IBD疑似病例的法氏囊病料进行RT-PCR（本文此处忽略..）检测,结果30份样品为IBDV阳性,同时将这些阳性病料经过过滤除菌,菌检阴性后的滤液经过CAM(ChorioallantoicMembrane)途径接种9日龄SPF鸡胚进行病毒分离,结果分离到30株IBDV毒株。同时通过具有型特异性的限制性核酸内切酶SspI/SacI对分离株的基因组VP2基因高变区(Hypervariableregion,HVR)进行酶切分析,结果表明,NN0704、WZ0608、HUN0801等26个毒株具有SspI酶切位点,符合vvIBDV(veryvirulentIBDV,vvIBDV)的特征;BB0901具有SacI酶切位点,符合cIBDV(classicalIBDV,cIBDV)的特征;JS0806及JS0822两个分离株既不具有SspI酶切位点,又不具有SacI酶切位点,既不符合vvIBDV的特征,也不符合cIBDV的特征;HUN0804既具有SspI酶切位点,又具有SacI酶切位点,不符合vvIBDV的特征,也不符合cIBDV的特征。该研究结果,为下一步从基因水平（此处忽略..）研究IBDV,跟踪当前IBDV的遗传进化规律奠定基础。研究对30个IBDV流行毒株的vVP2基因的核苷酸序列进行测定,与参考株的相应序列及其关键性位点进行分析比较并绘制遗传进化树。结果表明,30个分离株中,包括JS0806及JS0822在内以及经过酶切分型属于vvIBDV的分离株,共28个毒株(约占93.3%)在七肽区保持着SASWSGS不变,并且具备222A、249Q、254G、256I、279D、284A、294I、299S八个vvIBDV的特征性氨基酸,判定为vvIBDV,与已发表的超强毒株的同源性较高(为93%～100%),在遗传进化树上可分成3个分支,与常用疫苗株的亲缘关系则较远;HUN0804、BB0901在特征性氨基酸位点上具有弱毒株的特征,二者的同源性高,在进化树上与B87(BJ)的亲缘关系近。在氨基酸同源性上,所有的分离株与经典毒株CJ801、F52/70、Cu-1wt、Edgar的同源性为91.1%～96.8%,同源性较低,与常用疫苗株B87(in)、FW2512的同源性也仅有88.0%～93.7%,同源性低,与经典株及疫苗株相比在相关性的功能区域的氨基酸,特别是第一、第二亲水区发生（文章此处忽略..）了部分氨基酸的突变,如NN0603在212D、216F分别突变成212A、216L;QX0601在213D、216F分别突变成213H、216L;NN0704、QX0602则在212D、213D、216F分别突变成212A、213H、216L。这些突变均在与抗原决定簇形成有关的第一亲水区,可能引起该部位的亲水性发生改变,影响病毒的抗原性。综合上述研究结果表明,近5年来在广西、湖南、江苏的鸡群中流行的主要为vvIBDV毒株,各地的毒株来源复杂,部分IBDV分离株的抗原性有可能发生了漂移。研究还对安徽、广西、湖南、江苏、海南、浙江等六个省区于2000-2010年间分离的58个IBDV流行毒株进行了血清亚型的鉴定。首先将58个分离株与已经明确其血清亚型的6个IBDV血清I型的高免血清(YL052、TSC-2(9)、FW2512、B87(in)、BH11、NN040124)在Vero细胞上进行微量中和试验,根据中和滴度初步确定58个分离株的血清亚型;选取独立于上述血清亚型之外的中和滴度较低的分离株(JS7、TSC-1(3)、HUN0801)分别接种家兔,制备相应分离株的特异性高免血清,再将这些毒株与上述六个血清毒及其相应抗血清作病毒（此处忽略..）-血清微量交叉中和试验,对初步的血清分型结果进行进一步的验证。结果表明58个分离株均为血清I型,其中YL052、JS0802等56个分离株为一个血清亚型,归为亚型I;BH11(广西毒株)为一个亚型,归为亚型Ⅱ;JS7(江苏毒株)为单独一个亚型,归为亚型Ⅲ,而常用疫苗株属于亚型I。

以上为本篇毕业论文范文IBDV地方流行毒株的分离鉴定及生物学特性研究的介绍部分。

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