利用反向遗传操作技术构建IBDV候选疫苗株的研究

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利用反向遗传操作技术构建IBDV候选疫苗株的研究

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毕业论文范文题目：利用反向遗传操作技术构建IBDV候选疫苗株的研究，论文范文关键词：利用反向遗传操作技术构建IBDV候选疫苗株的研究
利用反向遗传操作技术构建IBDV候选疫苗株的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：鸡传染性法囊病病毒(Infectiousbursaldiseasevirus,IBDV)可引起雏鸡的急性、高度接触性、致死性传染病,即鸡传染性法氏囊病(Infectiousbursaldisease,IBD)。该病自从被发现以来,一直被养禽业所关注。疫苗的使用曾一度使该病得到较好的控制,但随着变异毒株(VariantIBDV)和超强毒株(VeryvirulentIBDV,vvIBDV)的出现,该病的防制变得严峻起来。疫苗免疫是防控vvIBDV的主要手段,但vvIBDV致病性很强且不适应细胞培养,活疫苗株的获得只能通过将野生vvIBDV在鸡胚或CEF细胞上传代致弱。这种传统的疫苗株驯化方法费时费力,而且结果带有随机性。对于高致病力的、易变异的vvIBDV的防控,特别是突发疫情的防控,开展新型疫苗株的构建研究十分必要。本研究通过流行病学调查分析,筛选到一株致死率高、抗原性出现（略..）漂变的亲本毒株HLJ0504。利用先分段扩增再融合全长的方法克隆了IBDV亲本毒株HLJ0504的全基因组并对其进行了测序。A、B节段长度分别为3260bp和2827bp,GenBank登陆号分别为GQ451330和GQ451331。软件分析发现,亲本毒株HLJ0504的VP2存在抗原漂变。遗传演化分析表明,亲本毒株A节段位于超强毒株分枝,而B节段在超强毒株和减毒株之间形成了1个独立分枝,是一株具有一定代表性的自然重组vvIBDV。为了研究IBDV新型疫苗株最适构建方案,本研究进行了疫苗株构建模式的筛选。首先以亲本毒株HLJ0504为骨架,突变了其主要保护性抗原VP2的两个氨基酸位点Q253H和A284T,拯救获得病毒rHLJ0504HT。rHLJ0504HT虽然能够适应细胞培养,但仍然具有较强的毒力。为了进一步降低其致病力,在rHLJ0504HT的基础上敲除IBDV的VP5蛋白,拯救出相应的病毒rHLJ0504HT△VP5。rHLJ0504HT△VP5对SPF鸡的毒力明显降低,但其在CE（此处忽略..）F细胞上的复制滴度不理想。为了获得高复制滴度、低致病力、遗传稳定、免疫效果良好的IBDV新型疫苗株,本研究突变了vvIBDV流行毒株HLJ0504的主要保护性抗原基因VP2的两个核苷酸位点(相应的氨基酸变化是Q253H和A284T),并将其替换IBDV弱毒株Gt基因组的相应区段,利用IBDV反向遗传操作系统,拯救并鉴定了重组病毒rGtHLJVP2。rGtHLJVP2具有如下生物学特点:1)良好的复制特性:在CEF细胞上与弱毒疫苗株Gt具有相似的复制动力学曲线,病毒滴度可达到107.3TCID50/ml;在SPF鸡的法氏囊内,rGtHLJVP2与Gt也具有相当的病毒载量。2)对SPF鸡无致病性:接种SPF鸡后的14天内,试验鸡的精神状态良好,未出现任何发病症状,法氏囊无明显的病理变化。3)遗传稳定性良好:rGtHLJVP2在CEF细胞和SPF鸡上分别盲传20代和8代,病毒滴度保持稳定,引入突变位点未发生回复突变,毒力也没有返（略..）强。4)免疫原性良好:rGtHLJVP2免疫SPF鸡后,7d80%血清抗体阳转,10d100%阳转,而且能够100%保护不同株的强毒攻击。目前,市场上IBDV活疫苗包括弱毒活疫苗、中等或中等偏强毒力活疫苗两类。本研究分别以Gt、B87作为这两类疫苗的代表,进行了免疫效果的比较试验。研究发现:1)rGtHLJVP2免疫效果优于Gt弱毒苗,与B87中等毒力疫苗相当。rGtHLJVP2免疫组产生的抗体滴度和攻毒保护效果均与B87中等毒力疫苗差异不显著,但优于Gt弱毒疫苗免疫组。2)rGtHLJVP2安全性优于B87中等毒力疫苗。rGtHLJVP2免疫组和弱毒株Gt一样,免疫后不会造成SPF鸡及其法氏囊的病理损伤,但中等毒力疫苗B87却对法氏囊造成不可修复的病理损伤。本研究筛选到一株高致死率、抗原性出现漂变、有一定代表性的vvIBDV毒株HLJ0504。以其为研究材料,将其VP2基因进行双点突变(相应的氨基酸变化是Q253H和A284T),并替换IBDV弱毒（略..）株Gt基因组的相应区段,利用IBDV反向遗传操作系统,拯救并鉴定了重组病毒rGtHLJVP2。该重组病毒复制滴度高、对SPF鸡无致病性、遗传稳定性和免疫效果良好、能保护不同株强毒攻击。而且rGtHLJVP2免疫效果优于市售的弱毒疫苗、安全性上优于中等毒力疫苗。rGtHLJVP2具备高效、安全、价廉、构建快速等特点,是一株良好的候选疫苗毒株。本研究为新型IBDV疫苗的进一步研发奠定了坚实的基础,对于IBDV突发疫情的应急防控具有重大意义。

以上为本篇毕业论文范文利用反向遗传操作技术构建IBDV候选疫苗株的研究的介绍部分。

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