IBRV XA株的分离鉴定及其gD蛋白的原核表达

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IBRV XA株的分离鉴定及其gD蛋白的原核表达

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毕业论文范文题目：IBRV XA株的分离鉴定及其gD蛋白的原核表达，论文范文关键词：IBRV XA株的分离鉴定及其gD蛋白的原核表达
IBRV XA株的分离鉴定及其gD蛋白的原核表达毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：传染性牛鼻气管炎病(Infectiousbovinerhinotracheitis,IBR)是由牛疱疹病毒1型(BHV1)引起的急性、热性、接触性传染病,主要牛的引起严重呼吸道和生殖道感染,给全球养牛业造成巨大的经济损失,国际兽医局(OIE)将本病列为B类疾病,也是我国进境动物必检疾病之一。BHV-1基因编码11种糖蛋白,主要糖蛋白gB和gD高度保守,是病毒的吸附、穿入和在细胞之间扩散病毒必需的,均能诱导产生较高水平的体液和细胞免疫,尤其gD能够引起比gB更强而持久的细胞免疫,而且gD基因可引起外（略..）周血单核细胞和牛淋巴细胞的凋亡,可促成感染牛免疫抑制。基于此,本实验进行了如下三个方面的研究工作。1牛传染性鼻气管炎病毒XA株的分离与鉴定用MDBK细胞从陕西发病奶牛鼻拭子中分离牛传染性鼻气管炎病毒;使用IBR标准阳性血清对该病毒分离物进行中和试验;应用primer5.0软件设计,根据Genbank公布IBRV的基因组序列,利用gB保守序列设计1对引物,对分离病毒进行PCR扩增,并测序。结果表明:分离病毒在MDBK细胞上产生明显的特征性细胞病变(CPE):细胞圆缩,聚集成葡萄串样群落,在（此处忽略..）单层细胞上形成空洞,有几个细胞核的巨大细胞;用标准抗IBRV特异性抗血清能完全中和分离株;用IBRVgB特异性引物进行PCR,可扩增出1182bp的特异性条带,目的序列与发表的IBRV的基因组序列一致。证明该分离株为牛传染性鼻气管炎病毒,命名为IBRVXA株。2牛传染性鼻气管炎病毒PCR检测方法的建立及应用参考GenBank中收录的IBRVgB基因序列,应用Primer5.0软件设计了一对引物,扩增目的片段为1182bp。同时对IBRVPCR检测方法进行了特异性、敏感性试验,并应用其对临床疑似发病（文章此处忽略..）牛血清及国内部分厂家生产的细胞培养用牛血清进行了检测。结果表明,该方法不仅具有较高的特异性,而且可检测出103.4TCID50/0.1mL的病毒量,病毒DNA最低检出量相当于2.16ng/20ul。98份样品中共检出12份阳性,阳性率为12.2%,其中陕西省不同地区牛场血清样品阳性率为12.8%(11/86),国内部分厂家生产的血清阳性率为8.3%(1/12)。说明该方法可用于IBRV的临床检测及流行病学监测。3牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白的原核表达参考GenBank中收录的IBRVgD基因序列,应用Primer5.0软件设计引物,用PCR方法成功扩增IBR（文章此处忽略..）VgD全基因,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建了gD基因的原核重组表达质粒pET-32a-gD。原核重组表达质粒pET-32a-gD转化大肠杆菌BL21(DE3),在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达gD蛋白,SDS-PAGE和Westernblot分析表达产物表明,表达产物具有与IBRV相同的抗原性。

以上为本篇毕业论文范文IBRV XA株的分离鉴定及其gD蛋白的原核表达的介绍部分。

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