鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白B细胞结合表位的研究

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鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白B细胞结合表位的研究

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毕业论文范文题目：鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白B细胞结合表位的研究，论文范文关键词：鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白B细胞结合表位的研究
鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白B细胞结合表位的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：传染性法氏囊病毒(infectiousbursaldiseasevirus,IBDV)是引起鸡传染性法氏囊病(infectiousbursaldisease,IBD)的致病病原体,主要侵害雏鸡中枢免疫器官-法氏囊,对B淋巴细胞造成损伤从而引起严重的免疫抑制,受到IBDV侵害的雏鸡易感染其它传染病并有可能导致疫苗接种失败,给家禽养殖业造成巨大损失。IBDV主要衣壳蛋白VP2组成病毒颗粒的表面并携带有中和性抗原表位。研究表明:VP2蛋白253、279、284位氨基酸残基突变不仅导致IBDV强毒株与弱毒株的不同,更是弱毒能在鸡胚成纤维细胞及Vero细胞等非B淋巴细胞上增殖的原因,因此推测三个位点氨基酸（此处忽略..）残基的突变可能影响了病毒颗粒与细胞受体的结合。为揭示IBDVVP2蛋白与其易感细胞受体结合的特性,本研究在对VP2蛋白进行生物信息学分析的基础上,将VP2蛋白分为相互重叠的6个片段(A、B、C、B1、B2、B3)。以本实验室保存的VP2基因为模板,PCR扩增得到了六个重叠片段的基因,并以VP2全长片段为阳性对照,包装T7噬菌体,并对重组噬菌体进行鉴定。挑选出的阳性噬菌体经PEG沉淀纯化后,用FITC标记,并与3～6周龄雏鸡法氏囊B细胞、Vero细胞结合。荧光显微镜观察结果显示:展示有VP2全长蛋白、VP2高变区B肽段及覆盖B的三段多肽B1、B2、B3的T7噬菌体均能于B细胞及Vero细胞结合,流式细胞术分（本文此处忽略..）析结果表明各片段结合B细胞的强度均大于Vero细胞,但VP2与B2的结合能力强与其他片段。表明VP2蛋白高变区是结合细胞受体的部位,而B2(覆盖253、279、284位氨基酸残基)对其结合有重要作用。因此VP2蛋白结合细胞受体的表位可能分布在高变区不同的区域,通过空间折叠形成的三维结构中相互聚集而形成一结合区域,但也可能结合表位只分布在B2上,B1、B3与细胞受体较弱的亲和力来自与B2相互重叠的区域。为进一步验证VP2蛋白片段与细胞受体结合的特性,将VP2蛋白及B片段基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1,稳定转染COS7细胞,用Ni-NTA亲和柱纯化重组蛋白,与B细胞及Vero细胞结合。结果显示阳性细胞能表达较（略..）好的绿色荧光,但重组蛋白与细胞作用后未发现荧光。可能是纯化过程中GFP蛋白失活导致荧光消失,或纯化的蛋白量太少,不能满足结合所需。重叠多肽扫描技术是鉴定配体表位及蛋白质相互作用的常用技术之一。本实验根据B2的氨基酸序列及空间结构特点,设计六条重叠多肽,Fmoc固相合成法合成并通过质谱仪鉴定。将六条多肽分别与B细胞及Vero细胞结合,再用荧光标记的展示有VP2蛋白的重组T7噬菌体与之作用,筛选出能有效抑制VP2蛋白与细胞受体结合的多肽。流式细胞术分析的结果表明多肽5t与6t对VP2结合细胞的抑制效果在B细胞与Vero细胞中均较为明显。在125μg/mL的时候就能显著抑制VP2与细胞的结合。（此处忽略..）两多肽重叠区含盖有关键氨基酸284位T,说明该氨基酸与B细胞及Vero细胞受体的结合是有关的。4n与细胞有一定的结合能力,这可能与该肽同样含有284位T有关,但其周围的氨基酸序列长短的不同影响了它与受体的结合。此外1h对B细胞有一定的抑制,而对Vero却不明显。本研究初步鉴定了强毒株IBDVVP2蛋白与细胞受体结合的可能性表位所在区,为从分子水平揭示病毒与宿主细胞的相互关系以及疫苗和多肽药物的开发提供了一定的理论基础。

以上为本篇毕业论文范文鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白B细胞结合表位的研究的介绍部分。

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