鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因的序列分析与表达

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鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因的序列分析与表达

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毕业论文范文题目：鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因的序列分析与表达，论文范文关键词：鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因的序列分析与表达
鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因的序列分析与表达毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：本研究根据国内外已经发表的传染性支气管炎病毒（IBV）核蛋白（NP）基因核苷酸序列，设计并合成了核蛋白基因的特异性引物NP3、4和NP5、6。利用RT-PCR技术分别对IBV国内分离株DB株、XJ株、DC株、HD株的核蛋白基因进行了特异性扩增，得到了大小为1.4Kb左右的核苷酸片段。之后，利用平端连接的方法将四个核蛋白基因片段分别克隆到载体质粒PUC19的SmaI酶切位点，经过酶切、PCR鉴定和序列测定证实分别得到了含有IBV核蛋（略..）白基因的重组质粒PUC19-XJ-N、PUC19-DC-N、PUC19-HD-N、PUC19-DB-N。其中PUC19-DB-N包含有DB株IBV的核蛋白全基因序列，全长1.23Kb，另外三个重组质粒分别包含有1.199Kb的核蛋白基因片段。将四株IBV国内分离株的核蛋白基因序列同Genbank数据库中已经发表的十株参毒株的核蛋白基因序列进行了比较分析，各毒株之间的同源性在86％-98％之间。利用Geuner软件推导出各毒株的核蛋白氨基酸序列，在氨基酸水平（本文此处忽略..）上不同毒株之间表现出的同源性在88％-97％之间。系统进化分析表明，我国的四个分离株跟澳大利亚群的N1/62株和VICS株的亲缘关系最为密切。其中，DC株已经单独成为一个分支，发生了较大程度的变异。设计并合成了另外一对核蛋白基因特异性引物NP7、8，上下游引物5′末端分别引入了BamHI和NcoI限制性内切酶位点，对pUC19-DB-N中的核蛋白基因进行了特异性扩增，扩增产物经过BamHI、NcoI的消化后，克隆到杆状病毒体外表达系统转移（此处忽略..）载体pBlueBacHisB的BamHI和NcoI位点之间，经过酶切、PCR鉴定证明得到了重组转移载体pBlue-DB-N，序列分析证实其中的核蛋白基因读码框完全正确可以用于转染实验。在脂质体转染试剂介导下，将重组杆状病毒转移载体pBlue-DB-N与线性化的杆状病毒DNA共转染对数生长期的Sf9昆虫细胞，经过三轮蚀斑纯化，获得了重组杆状病毒rBac-DB-N。提取重组杆状病毒DNA利用特异性引物NPa/b进行PCR（此处忽略..）扩增得到了大小为2Kb左右的片段，证明目的基因片段克隆到了杆状病毒基因组中。Westernblot实验结果表明核蛋白基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中得到了表达，并且具有良好的生物学活性。SDS-PAGE电泳分析显示重组病毒表达的融合蛋白分子量为56KDa左右，薄层扫描显示核蛋白的表达量占细胞蛋白总量的19.4％左右。

以上为本篇毕业论文范文鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因的序列分析与表达的介绍部分。

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