猪瘟病毒E2蛋白在昆虫细胞中的表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

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猪瘟病毒E2蛋白在昆虫细胞中的表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

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毕业论文范文题目：猪瘟病毒E2蛋白在昆虫细胞中的表达及间接ELISA抗体检测方法的建立，论文范文关键词：猪瘟病毒E2蛋白在昆虫细胞中的表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
猪瘟病毒E2蛋白在昆虫细胞中的表达及间接ELISA抗体检测方法的建立毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：猪瘟(ClassicalSwineFever,CSF)是由猪瘟病毒引起的一种高度接触性热性传染病,猪是其唯一的自然宿主。病毒可通过胎盘传染,造成胎儿死亡和先天性感染猪迟发病和死亡。发病率、致死率高,在猪业造成严重损失。因此,猪瘟病毒的检测技术历来为国际畜牧兽医界所重视。CSFV的诊断方法很多,其中,血清学抗体检测应用较多。ELISA方法特异性好,灵敏度高,使用广泛。在CSFV的结构蛋白中,E2囊膜糖蛋白是（本文此处忽略..）CSFV主要保护性抗原蛋白,能诱导机体产生中和抗体。所以,它既是人们研究CSFV新型疫苗的主要对象,也是建立CSFV血清学检测方法的首选抗原。本研究目的是将E2蛋白N端包含主要抗原区的一段序列(E2-1)(含N端高保守序列)克隆入杆状病毒表达载体系统中,转染昆虫细胞,获得体外表达的E2-1蛋白,并将该蛋白作为包被抗原建立间接ELISA抗体检测方法。主要内容包括:1.杆状病毒表达CSFVE2-1:用RT-PCR技术从国内分离（文章此处忽略..）的CSFV疫苗株中获得大小为537bp的PCR产物,将其克隆至pFastBac~(TM)HTA转移载体,转化DH5α,然后在LB平板上挑取阳性菌落,得到的重组转移质粒pFastBac~(TM)HTA-E2-1,再提取阳性克隆质粒转化到含杆状病毒穿梭载体Bacmid的受体菌E.coliDH10Bac中,发生转座作用,在舍庆大霉素,卡那霉素,四环素3种抗生素和X-gal/IPTG的LB培养板上,筛选出白色菌落得到重组穿梭载体Ba（本文此处忽略..）cmid-E2经PCR鉴定为阳性后,采用阳离子脂质体法转染到Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒,经IFA、SDS-PAGE和Western-blotting鉴定,结果表明,E2-1蛋白在Sf9昆虫细胞中成功表达。2.间接ELISA抗体检测方法的建立:在上述工作的基础上,以重组杆状病毒E2-1蛋白为包被抗原,经条件优化,建立了监测CSFV血清抗体水平的间接ELISA方法,并用以重组杆状病毒E2-1蛋白建立的ELISA法和猪瘟（略..）IDEXX抗体检测ELISA试剂盒同时检测92份猪血清,检测结果显示符合率达到83.7%,并用该方法检测了135份临床血清样品。本试验成功表达了重组杆状病毒E2-1蛋白(约22kDa);建立的间接ELISA诊断方法具有良好的特异性和敏感性,为免疫猪群抗体监测和CSF流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学检测方法。

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