禽传染性支气管炎病毒B、T细胞抗原表位EpiW-GST多肽疫苗研究

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禽传染性支气管炎病毒B、T细胞抗原表位EpiW-GST多肽疫苗研究

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禽传染性支气管炎病毒B、T细胞抗原表位EpiW-GST多肽疫苗研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：禽传染性支气管炎是危害养禽业的重大传染病之一,它是由冠状病毒科冠状病毒属的禽传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性高度接触性传染病,IBV在复制过程中很容易发生变异,血清型多,且各型之间交叉保护力弱,所以传统的灭活疫苗和弱毒疫苗还需改进。表位肽疫苗是一种纯粹抗原性疫苗,它安全、稳定,对多种血清型有交叉保护,已成为未来疫苗发展的重要途径之一。本研究采用本实验室前期设计的EpiW序列即包含了IBVB,T细（略..）胞抗原表位的一段基因序列为基础材料,对EpiW多肽进行生物信息学的验证分析,结果表明:目的片段保持了较高的同源性;其亲水性、抗原指数性和表面可能性较高;表位之间的连接序列(linker)不会干扰表位的独立性,可被切割成预计大小片段,保证了表位加工和递呈;表位肽主要位于重组蛋白结构表面,便于和抗原呈递分子结合,从理论上保证实验设计的准确性。将EpiW序列片段经过PCR定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构（文章此处忽略..）建含IBVB,T细胞抗原表位序列EpiW的原核表达载体pGEX-EpiW,并经过PCR和酶切鉴定基因克隆正确后转化大肠杆菌感受态细胞BL21,筛选出阳性克隆,诱导表达并取产物进行分析。结果表明,EpiW基因片段获得了融合表达。利用GST谷胱甘肽凝胶,纯化了相应的抗原表位多肽EpiW-GST,并将其作为包被抗原,检测IBV标准阳性血清,初步研究表明抗原表位多肽能和阳性血清产生免疫反应;进一步采用Wester（此处忽略..）nblot分析表明,该蛋白能与标准阳性血清发生特异性反应,证明该蛋白具有生物学活性。为了评价多肽疫苗的免疫效果,将纯化的抗原表位融合多肽EpiW-GST配以弗氏佐剂进行动物免疫试验,并以灭活苗、GST和PBS为试验对照组,细胞免疫采用流式细胞仪(FACS)对免疫鸡外周血中CD4+、CD8+T淋巴细胞数进行检测,IBV特异性抗体采用ELISA法进行检测,并进行攻毒试验。结果表明:EpiW-GST能有效激发鸡体特（本文此处忽略..）异性体液和细胞免疫,EpiW-GST多肽组检测到特异性抗体,与对照组差异显著(P＜0.05)。EpiW-GST多肽疫苗免疫后能刺激CD4+、CD8+T淋巴细胞亚类水平增高,与对照组差异显著(P＜0.05)。攻毒试验表明,EpiW-GST多肽保护效果较好,略低于灭活苗。本研究进行了IBV多肽疫苗免疫原性的研究,为传染性支气管炎的多肽疫苗和血清学抗体诊断的研制提供了一种基础材料。

以上为本篇毕业论文范文禽传染性支气管炎病毒B、T细胞抗原表位EpiW-GST多肽疫苗研究的介绍部分。

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