鸡传染性支气管炎病毒陕西地方株的分离鉴定及S1基因的克隆和序列分析

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鸡传染性支气管炎病毒陕西地方株的分离鉴定及S1基因的克隆和序列分析

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鸡传染性支气管炎病毒陕西地方株的分离鉴定及S1基因的克隆和序列分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：近几年来,传染性支气管炎(IB)在陕西各地鸡场常有发生,给养禽业生产造成了巨大的损失。为了及时、准确的掌握该疫病发生发展规律,有效地对其进行控制,本研究开展了对陕西地区鸡传染性支气管炎病原的分离鉴定等工作。采集陕西省宝鸡市、扶风县、兴平市和榆林市等地鸡场疑似传染性支气管炎发病鸡病料,通过9～11日龄非免疫鸡胚进行了病毒的实验室分离和传代,并对分离毒株进行了病毒的血凝性、血凝抑制性、致病性（略..）、鸡胚矮小化、电镜特征等生物学特性鉴定,结果表明,4株分离株经1%胰酶处理后的各代病毒尿囊液均可凝集鸡红细胞,标准阳性血清可特异性的抑制其凝集性,回归试验可复制出与自然发病相同的病例,病毒传代物有明显的致鸡胚矮小化作用,透射电镜下可见有近似球形、直径100nm左右的冠状病毒粒子,将分离鉴定的4株IBV定名为BJ-04、FF-04、XP-03和YL-04。参考GenBank中已发表的IBV序列,针对S1基因设计（本文此处忽略..）了3条特异性引物,提取病毒RNA,用RT-PCR方法均扩增到长约1.8kb的特异目的片段;PCR产物纯化回收后,与pMD18-T载体连接,将重组质粒转化E.coliDH5a;经Amp+的培养基培养并挑出单克隆菌落;采用碱裂解法小量提取质粒,并用BamHⅠ,HindⅢ双酶切法和质粒PCR进行阳性筛选;取阳性质粒DNA进行测序。将所测定的分离株S1基因核苷酸序列通过互联网提交到NCBI中nucl（本文此处忽略..）eotide-nucleotideBLAST进行检索以及与GenBank中注册的核苷酸序列进行比较;利用DNAStar5.0软件对分离株和M41、T等已知序列毒株进行核苷酸及氨基酸序列同源性分析,绘制进化树,推测分离株与参考株之间的遗传距离;并对分离株S1蛋白亲水性、抗原位点和糖基化位点等特性进行了理论上的分析;结合S1基因酶切位点分析,可知在变异形式上,4个毒株S1基因均存在碱基的置换、插入（略..）与缺失;在进化关系上,FF-04和XP-03S1基因同源性最高,亲缘关系最近;BJ-04和YL-04S1基因同源性较高,亲缘关系较接近;4个分离株S1基因较呼吸型和肾型标准株S1基因同源性均较低,亲缘关系较远,而且其基因型均为变异型。本研究丰富了IB分子流行病学资料,为IB的诊断和预防奠定了良好的基础。

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