鸡白痢沙门氏菌部分生命必需基因的鉴定

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鸡白痢沙门氏菌部分生命必需基因的鉴定

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毕业论文范文题目：鸡白痢沙门氏菌部分生命必需基因的鉴定，论文范文关键词：鸡白痢沙门氏菌部分生命必需基因的鉴定
鸡白痢沙门氏菌部分生命必需基因的鉴定毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：鸡白痢沙门氏菌(S.pullorum)又称雏沙门氏菌,引起雏鸡急性败血症,多侵害20日龄以内幼雏,日龄较大的雏鸡可表现白痢,发病率和致死率相当高。对成年鸡主要感染生殖器官,表现为慢性局部炎症,常导致母鸡产蛋明显下降,并经卵传染,所产蛋的孵化率和出雏率也明显降低。还可感染火鸡,对其他禽和鸟类偶能感染。必需基因是维持一个细胞的生命活动所必不可少的基因,必需基因所编码的蛋白质的功能被认为是生命活动的基础,必需基因的总和构成了维持一个细胞生命活动的最小基因集合。从必需基因的定义看,去除（本文此处忽略..）一个必需基因会使一个生物体无法继续存活,这是非常具有实际意义的。例如,由于大部分抗生素作用于细胞的基本过程,微生物必需基因的翻译产物就有可能成为抗细菌药物的靶点,这对人类开发抗菌药物是非常有意义的。pIDM1质粒是一类专属于革兰氏阴性细菌的温度敏感质粒。因为它含有编码温度敏感复制蛋白RepAts的基因,所以在30℃时该质粒复制,在高于37℃不复制。该质粒具有四环素抗性。本实验是通过插入复制突变(insertionduplicationmutagenesis)来鉴定鸡白痢沙门氏菌必需基（略..）因。首先,设计含有KpnⅠ酶切位点rpcr引物扩增长度为350-450bp的片段。用温度敏感质粒pIDM1构建鸡白痢沙门氏菌的基因文库。首先用KpnⅠ酶切pIDM1,脱磷,然后与酶切后的rPCR产物连接,然后转化中间宿主细胞大肠杆菌TG1,构建基因文库。基因文库的克隆数在5×105。鉴定基因文库的插入率为90%。然后提取基因文库所有克隆的质粒,转化鸡白痢沙门氏菌,构建以鸡白痢沙门氏菌为宿主菌的基因文库。复核基因文库插入率为90%。基因文库的细菌内所含的pIDM1的克隆片段与细菌染色体对应的片段,发生同源重组的（略..）的几率为10-5。通过转换不同的生长温度,导致部分克隆发生同源重组,若克隆子上必需基因片段插入鸡白痢沙门氏菌的必需基因,导致细菌死亡,而非必需基因的插入的突变体则仍旧在抗生素平板上生长,然后通过负筛选找出含有必需基因的克隆。PCR扩增必需基因片段,测序,测序结果送BlastN分析,我们共得到5个必需基因,分别为：btuE、bglA、gltA、cheV、metG。其中btuE已被发现是Escherichiacoli的必需基因,该基因编码的蛋白为：vitaminB12ABCtransp（略..）ortATP-bindingprotein。metG已被发现是Escherichiacoli、Haemophilusinfluenzae、Mycoplasmagenitalium、Salmonellatyphimurium共同的必需基因,该基因编码的蛋白为methionyl-tRNAsynthetase。bglA、gltA、cheV是本实验最新发现的鸡白痢沙门氏菌C79-11-S2的必需基因。

以上为本篇毕业论文范文鸡白痢沙门氏菌部分生命必需基因的鉴定的介绍部分。

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