猪CASQ2基因敲除载体及其胚胎成纤维细胞系的构建

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猪CASQ2基因敲除载体及其胚胎成纤维细胞系的构建

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毕业论文范文题目：猪CASQ2基因敲除载体及其胚胎成纤维细胞系的构建，论文范文关键词：猪CASQ2基因敲除载体及其胚胎成纤维细胞系的构建
猪CASQ2基因敲除载体及其胚胎成纤维细胞系的构建毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：心肌细胞内的Ca~(2+)主要通过与集钙蛋白(calsequestrin2,CASQ2)结合的方式储存,集钙蛋白功能是否完善,将直接影响心脏兴奋-收缩耦联过程中胞浆游离Ca~(2+)浓度的平衡。研究发现,部分儿茶酚胺性多形性室性心动过速(catecholaminergicpolymorphicventriculart（文章此处忽略..）achycardia,CPVT)患者伴有CASQ2基因突变,为转录提前终止导致的集钙蛋白缺乏所致,CASQ2基因敲除小鼠能够存活,有繁殖能力,且表现出惊人的肌浆网量增加,舒张期肌浆网Ca~(2+)泄漏,易发生CPVT。由于小鼠的生理结构与人类的差异较大,在小鼠上的实验结果不能完全反映人类疾病的发病机理,此外（此处忽略..）,还有许多研究在小鼠上无法进行,而猪的各项指标特别是心血管系统与人类极其接近,本研究选择猪作为研究模型,旨在阐明CASQ2在人类CPVT发生过程中的作用,探索新的诊断方法与治疗方法,为新药的研发提供理想的动物模型。本研究采用高保真LaTaq酶,通过PCR反应来扩增获得同源臂(长臂长为4.7kb,短臂长1.（此处忽略..）7kb),将同源臂分别克隆到pMD18-T载体上,酶切、PCR鉴定后进行序列测定并将序列与已知相应片段进行同源性分析。再将同源长、短臂克隆到pSSC-9通用型基因敲除载体中预留的单一酶切位点上,酶切、PCR鉴定、筛选得到CASQ2基因敲除正、负筛选载体。然后用FuGENEHDTransfectionReag（略..）ent介导线性化的载体转染猪胚胎成纤维细胞,先用G418筛选5～8天后,再用G418和GANC筛选7～10天,得到抗性细胞株,后用含G418和GANC的细胞培养液扩大培养,经PCR鉴定获得1株纯化的猪CASQ2基因敲除胚胎成纤维细胞。

以上为本篇毕业论文范文猪CASQ2基因敲除载体及其胚胎成纤维细胞系的构建的介绍部分。

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