PRRSV野毒株的分别及GP5膜糖蛋白的表白与免疫原性分析

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PRRSV野毒株的分别及GP5膜糖蛋白的表白与免疫原性分析

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毕业论文范文题目：PRRSV野毒株的分别及GP5膜糖蛋白的表白与免疫原性分析，论文范文关键词：PRRSV野毒株的分别及GP5膜糖蛋白的表白与免疫原性分析
PRRSV野毒株的分别及GP5膜糖蛋白的表白与免疫原性分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：猪繁殖与呼吸综合征(porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)是以母猪流产及仔猪呼吸体系妨碍为重要病征的感染病,病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)。该病毒感染性强,而且感染机体后致免疫克制及各种并发症,给养猪业造成宏大迫害跟经济丧失。病毒基因的变异也给防治增加了难度。糖基化囊膜蛋白5(GP5)是PRRSV的重要构造蛋白,存在结合细胞受体及引诱细胞凋亡等功能,而且该蛋白能引诱中跟抗体产生,是新型疫苗设计的重要靶蛋白,因此在病毒的生理功能及PRRS的防治上存在重要作用。本研究从山东泰安及周边地区多（此处忽略..）个猪场取无名高热病猪猪肺组织等通过惯例病毒检测跟分别方法,经过细胞病变跟间接免疫荧光检测证明所分别到的PRRSV是一山东处所风行毒株,命名为SD-4。根据PRRSV美洲经典株VR-2332的ORF5基因设计特异引物,进行RT-PCR跟基因克隆ORF5基因,分析其与国内外PRRSV毒株差别,为该病的风行病学考察提供实际根据;同时,利用大肠杆菌在体表面白了GST-tGP5,并对重组蛋白的抗原特点进行研究;针对有些PRRSV疫苗未能对猪机体提供完全保护的情况,本研究还利用400余份猪血清树破了一个间接ELISA体系,来间接反应机体抗PRRSV的抗体程度,为领导当地出产防疫跟开发该病的新型疫苗以及评估疫苗免疫后果的试剂盒的研制奠定基本。从2007年底山东无名高热病猪（此处忽略..）送检样品肺部组织,提取猪肺组织的总RNA并利用RT-PCR技巧扩增出编码GP5的ORF5基因。目标DNA片段连接到pMD18-T载体长进行DNA序列测定。成果发明山东分别株SD-4ORF5基因大小为603bp,编码200个氨基酸残基,通过分析ORF5基因序列及与其它毒株的比较,将北美洲株分为Ⅰ亚群跟Ⅱ亚群。SD-4的核苷酸与Ⅰ亚群跟Ⅱ亚群及欧洲毒株比拟同源性分辨为87.4%～89.9%、92.7%～99.2%跟63.7%～63.8%。其氨基酸序列的同源性比拟分辨为85.1%～91.0%、90.5%～99.5%跟56.7%～57.7%。进化树分析成果表明SD-4与高致病性毒株JXA1,HUB1,HEB1跟SY0608的亲缘关联很近。同时设计引物从重组质粒pMD18-T-ORF5中扩增出缺失了N端26个氨基酸残基的tGP5编码序列tORF5,目标基因亚克隆构建成重组表白质粒pGEX-（本文此处忽略..）6p-tORF5,转化大肠杆菌后引诱表白。表白产物经过SDS-PAGE及Western-blot分析,证明为tGP5与谷胱甘肽转移酶(GlutathloneS-transferase,GST)的融合表白蛋白,分子量为40kDa,表白量占菌体总蛋白的20%左右,重要以包涵体情势存在。经过切胶纯化跟电洗脱后的GST-tGP5蛋白纯度可达95%以上,并能与PRRSV阳性猪血清产生特异性反应,而标签蛋白GST不与该血清反应。将纯化后的表白蛋白包被ELISA板后对标准阴/阳性血清进行检测,成果在抗原包被浓度为100ng/孔,血清稀释度为400倍稀释的前提下P/N值最大。用此实验前提对62份PRRSV阴性血清进行ELISA检测后推导出以S/P值0.4作为阳性血清断定的临界点。S/P值大于（此处忽略..）0.4的血清断定为阳性血清,反之小于0.4的为可疑或阴性。此检测体系的成果与病毒中跟实验的成果一致性达94.12%。以纯化后的融合蛋白作为抗原免疫小鼠,制备出的抗GST-tGP5融合蛋白血清经间接ELISA跟间接免疫荧光鉴定,得到跟GST-tGP5特异性反应的多克隆抗血清,其滴度为1/20000以上。但该抗血清是否能在体外甚至体内实验中对病毒的感染起中跟作用还有待进一步研究。

以上为本篇毕业论文范文PRRSV野毒株的分别及GP5膜糖蛋白的表白与免疫原性分析的介绍部分。

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