猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白原核表白及抗体间接ELISA检测方法的

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猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白原核表白及抗体间接ELISA检测方法的

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猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白原核表白及抗体间接ELISA检测方法的毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)是近年来发明的一种新的病毒,引起猪的繁殖跟呼吸体系症状。该病以繁殖母猪发热、厌食跟流产、木乃伊胎、弱仔等繁殖妨碍以及仔猪的呼吸道症状跟高逝世亡率为特点。而且该病通过胎盘、空气等多种道路传播,所以对PRRSV的检测及防备尤为重要,树破一种疾速高效的诊断方法对PRRSV的把持存在重粗心义。本实验（此处忽略..）重要进行了如下研究。将美洲型VR2332株细胞毒提取总RNA,根据GenBank上的参考序列设计了一对扩增猪蓝耳N基因的特异性引物,在引物的高低游分辨带有BamHI、HindⅢ酶切位点。通过RT-PCR获得长约372bp的目标片段。将其克隆到pMD18-T载体,获得重组质粒pMD-N。用雷同的限度性内切酶酶切阳性质粒pMD-N跟表白载体pET-32a后构建重组表白载体,转化宿主菌BL21,经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序证明目标基因以（本文此处忽略..）正确的浏览框插入了表白载体,用0.1mol/L的IPTG引诱表白N蛋白重要抗原区,再以28℃持续培养5h,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,原核表白产物大小约为34kDa。这样的培养前提下表白量最大,经分析表白蛋白量约占菌体蛋白的20.1%。表白产物经Western-blotting分析,能被猪繁殖与呼吸综合征高免血清所辨认。实验成果表明猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白抗原区在大肠杆菌中高效表白且表白产物存在抗原性。目标蛋白经大量引诱表（略..）白,可溶性实验证明重组蛋白部分以可溶性格势存在于引诱菌液上清中,本实验用镍柱亲跟层析法从上清中纯化了目标蛋白。纯化后的目标蛋白作为抗原包被聚乙烯微量反应板,初步树破检测PRRSV抗体的间接ELISA诊断方法。实验成果表明:抗原的最适包被浓度为51.7μg/mL,血清最适稀释度为1:50,最佳血清反应时光断定为37℃15min,二抗反应时光断定为37℃10min,底物显色液的最佳反应时光为5min。统计学分析后断定阴阳性的临界值为0.35。经反复性实验（文章此处忽略..）、穿插实验等实验,成果表明该方法反复性好、特异性强、敏感度高;将树破的N-ELISA方法与美国IDEXX公司PRRSV抗体检测试剂盒比拟较,其特异性跟敏感性分辨为85.7%跟94.7%,合乎率达到91.7%,统计学分析,这两种检测方法的检测成果无明显性差别。该方法的树破为蓝耳病毒抗体监测提供了一种比较实用的血清学检测方法。

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