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盐地碱蓬SsPrx Q基因的克隆与功能鉴定

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毕业论文范文题目：盐地碱蓬SsPrx Q基因的克隆与功能鉴定，论文范文关键词：盐地碱蓬SsPrx Q基因的克隆与功能鉴定
盐地碱蓬SsPrx Q基因的克隆与功能鉴定毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：很多代谢反应像光配合用、光呼吸以及呼吸作用都可能产生活性氧，尤其是在极端的环境中。活性氧不可避免的对生物大分子如脂质、蛋白质以及DNA等造成氧化伤害，但也可能作为信号分子调节基因的表白跟酶活性并参加防备反应。因此活性氧必须被把持在恰当的程度以保持畸形的细胞代谢。生活在有氧前提下的生物构成了一系列抗氧化体系来保护细胞免受氧化伤害。一种被称作过氧还蛋白(Prx)的不含血红素辅基的过氧化物酶家族最近引起人们的留神，它广泛存在于所有的生物中，可能利用硫氧还蛋白(Trx)、谷氧还蛋白(Grx)以及cyclophilinA（文章此处忽略..）等作为电子供体还原H_2O_2以及各种烷基过氧化物，生成水跟相应的醇。大量的研究表明Prxs在光合，韧皮部代谢跟环境胁迫中存在重要作用。动物中的过氧还蛋白共分为四类：1-CysPrx、2-CysPrx、TypeⅡPrx以及PrxQ。其中PrxQ首先从佛甲草(Sedumlinear)中被克隆，与细菌铁蛋白共迁徙蛋白(BCP)同源性很高。目前对PrxQ的很多研究重要集中在生化功能方面，而对它的生理功能、表白特点研究较少。本实验通过EST随机挑取克隆测序的策略从盐地碱蓬叶片cDNA文库分别得到4个编码盐地碱蓬过氧还蛋白Q(S（本文此处忽略..）sPrxQ)的部分cDNA序列，通过5’-RACE的方法得到5’端全长。由序列设计两端特异性引物，RT-PCR扩增到SsPrxQ的全长cDNA。序列分析表明它与已经报道的其它物种中的SsPrxQ的蛋白序列存在较高的同源性。SsPrxQ基因全长1003bp，含有一个编码214个氨基酸的开放读码框，分子量约为24KDa，N-末端有64个氨基酸的叶绿体转运肽，定位于叶绿体中。Southern杂交表明SsPrxQ在基因组中以单拷贝的方法存在。Northern分析表明盐地碱蓬SsPrxQ在盐、低温处理下表白量明显高于对比；甘露醇、ABA（略..）、H202、甲基紫精(MV)都能引诱SsPrxQ的大量表白，表明SsPrxQ参加了对各种胁迫的反应。为了验证它的功能本实验构建了原核表白载体(pGEX-6p-1+SsPrxQ)跟动物适量表白载体(pROKⅡ+SsPrxQ)。在大肠杆菌中适量表白GST-SsPrxQ融合蛋白，为了进一步对PrxQ进行酶活分析，用PreScissionProtease酶切GST融合蛋白，得到大概24KDa的蛋白。它可能保护质粒免受自由基的破坏，并存在硫氧还蛋白依附的过氧化物酶活性，硫氧还蛋白可能作为它的电子供体。利用花浸染法将农杆菌携带的双元表白（本文此处忽略..）载体pROKⅡ+SsPrxQ转入拟南芥，通过多次筛选已经获得了转基因拟南芥的纯合植株。PCR跟Southern成果证明外源SsPrxQ已整合盐地碱蓬及尸rxQ基因的克隆与功能鉴定到拟南芥基因组中。Northem杂交成果表明插入拟南芥中的Ss尸rxQ基因己经畸形转录。对获得的转基因植株的表型分析发明，在低温以及100mMNaCI处理下，转基因植株的成长状况明显好于野生型，在必定程度上进步了其对胁迫的耐受才能。

以上为本篇毕业论文范文盐地碱蓬SsPrx Q基因的克隆与功能鉴定的介绍部分。

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