猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用

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猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用

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毕业论文范文题目：猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用，论文范文关键词：猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用
猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：猪圆环病毒(porcinecircovirus,PCV)病是由猪圆环病毒2型（PCV2）引起的猪的传染病，与断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎与肾病综合征（PDNS）、繁殖障碍等多种病征有关，并且PCV2感染可以造成免疫抑制，引起其他各种病原的继发感染，加重发病程度。为对猪圆环病毒2型的临床诊断及流行病学调查提供简便、快速的试验方法和工具，本研究应用大肠杆菌原核表达系统对PCV2的Cap蛋白进行了重组表达，应用镍琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化重组蛋白后，以其为抗原建立了间接ELISA检测方法，并在建立的间接ELISA（此处忽略..）检测方法的基础上，研制了可用于临床检测的猪圆环病毒2型ELISA试剂盒。猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组表达及免疫原性分析：针对PCV2ORF2基因编码的Cap蛋白具有PCV2的大部分抗原表位，用特异性引物扩增ORF2部分基因，该基因序列去掉了ORF2基因编码蛋白N端的信号肽基因序列，然后克隆入表达载体pET-32a（+），经E.coliBL21（DE3）用IPTG诱导目的蛋白表达。SDS-PAGE和Western-blotting鉴定表明，成功表达出目的蛋白（40ku），目的蛋白能与猪PCV2阳性血清发生反应，具有反应原性。表明该重组C（文章此处忽略..）ap蛋白可作为包被抗原。猪圆环病毒2型重组Cap蛋白的纯化及间接ELISA方法的建立：为使Cap蛋白得到最大程度的表达，通过试验表明最佳诱导温度、时间以及IPTG浓度分别为30℃、6h、1mmol/L，表达蛋白占菌体总蛋白的20.71%，经Ni2+琼脂糖凝胶亲和层析纯化后重组蛋白浓度为679.34μg/mL。将经超声破碎、亲和层析柱纯化的Cap蛋白作为包被抗原，建立了间接ELISA检测方法：最佳抗原包被浓度为4μg/mL，包被时间为37℃1h+4℃过夜；封闭剂为5%脱脂奶粉，封闭时间为4℃过夜；一抗最佳稀释度为1︰100，作用时间为1h；二抗最佳稀释度为1︰8000，作用时（略..）间为1h；显色时间为5min。当血清P/N值大于0.3280时，为阳性；当血清P/N值小于0.2868时，为阴性；当P/N值介于0.3280、0.2868之间时，为可疑。与商品化试剂盒相比，其敏感性、特异性和符合率分别为95.12%、92.86%和94.55%；同时与猪圆环病毒1型（PCV1）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）等多种病毒无交叉反应。猪圆环病毒2型ELISA检测试剂盒的研制及初步应用：利用已建立的猪圆环病毒2型间接ELISA检测方法研制ELISA检测试剂盒，并用同一批次和不同批次的试剂盒检测不同抗体效价的血清，结果变异系数均小于5%，表明具有较好的重复（此处忽略..）性；试剂盒在-20℃至少可保存1年以上。最后将试剂盒应用于临床血清样品的检测，结果安徽、广东、广西采样猪场的PCV2阳性率分别为：100%、48.39%、100%。本研究为猪圆环病毒2型的临床诊断及流行病学调查提供了简便、快速的检测方法和工具，也为猪圆环病毒2型ELISA检测试剂盒的进一步商品化提供了技术资料。

以上为本篇毕业论文范文猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用的介绍部分。

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