猪C3d分子佐剂增强PRRSV GP5核酸疫苗免疫效果的研究

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猪C3d分子佐剂增强PRRSV GP5核酸疫苗免疫效果的研究

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毕业论文范文题目：猪C3d分子佐剂增强PRRSV GP5核酸疫苗免疫效果的研究，论文范文关键词：猪C3d分子佐剂增强PRRSV GP5核酸疫苗免疫效果的研究
猪C3d分子佐剂增强PRRSV GP5核酸疫苗免疫效果的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：基因疫苗主要是由真核表达载体和保护性抗原基因构成的,与传统疫苗相比较,具有设计灵活、安全性高、性质稳定、成本低、同时诱导体液免疫和细胞免疫等优点。然而核酸疫苗同时存在抗体产生慢且水平低的问题,需要加入有效的佐剂才能克服这些缺点。C3d片段是补体C3的裂解片段之一,是C3分子ɑ链不能被蛋白酶再裂解并仍保持与抗原共价连接的最小片段,具有广泛的免疫学功能。C3d可以直接与抗原递呈细胞(APC)上的CR2受体结合,降低淋巴细胞的活化阈,提高抗原分子的免疫原性。因此C3d被认为是基因疫苗的有效的分子佐剂。猪繁殖与呼吸综合征(porcinereprodu（本文此处忽略..）ctiveandrespiratorysyndrome,PRRS)是以母猪流产及仔猪呼吸系统障碍为主要病征的传染病,病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)。该病毒传染性强,而且感染机体后致免疫抑制及各种并发症,给养猪业造成巨大危害和经济损失。病毒基因的变异也给防治增加了难度。糖基化囊膜蛋白5(GP5)是PRRSV的主要结构蛋白,具有结合细胞受体及诱导细胞凋亡等功能,而且该蛋白能诱导中和抗体产生,是新型疫苗设计的主要靶蛋白。本实验构建了pcDN（此处忽略..）A3.1-GP5-p28.n(2、4、6)重组质粒,并对其免疫效果进行了初步研究,主要研究内容如下:采集经油乳剂灭活苗免疫刺激的长白猪肝组织提取肝脏总RNA,RT-PCR扩增获得C3d基因的cDNA,克隆到pMD18-T载体,转化大肠杆菌BL21,酶切鉴定后测序。PCR结果显示,在888bp处有一明亮条带,与预期大小一致;经测序发现与长白猪C3d基因的同源性为99.9%,证明获得猪C3d基因。将猪C3d基因与鼠和鸡的C3d基因同源性比较,结果分別为81.9%和67.2%。分析猪C3d的CR2结合区,发现该区为28个氨基酸,且哺乳动物的CR2结合区的同源性较高(近80%),与禽类CR2结合区的同源性仅为40%,显示出明显（本文此处忽略..）的种属差异性。在克隆出C3dcDNA基础上,设计引物克隆P28至pUC19载体,利用同裂酶BamHI和BglII构建pUC-P28.n。酶切获得P28.n,将其克隆至真核表达载体pCDNA3.1(+)。最后RT-PCR扩增PRRSV-GP5基因,定向克隆至真核表达载体pCDNA-P28.n中P28.n的上游,构建完成pcDNA3.1-GP5-p28.n(2、4、6)重组质粒。酶切鉴定证明成功构建了pcDNA3.1-GP5-p28.n(2、4、6)重组质粒。大量提取重组质粒,转染Marc145细胞,经间接免疫荧光证明重组质粒能在细胞内表达。重组质粒免疫小鼠,通过ELISA试剂盒检测小鼠体内抗体、IL-4和IF（本文此处忽略..）N-γ的水平,结果显示,抗体效价、IL-4和IFN-γ含量均比对照组高,且以pcDNA3.1-GP5-P28.6组的效果最好,与空白对照及PCDNA3.1-GP5组比较差异均显著(P0.05)。证明该质粒可刺激机体产生较高的体液免疫和细胞免疫水平,补体C3d-P28分子佐剂能显著增强PRRSVGP5基因的免疫效果。

以上为本篇毕业论文范文猪C3d分子佐剂增强PRRSV GP5核酸疫苗免疫效果的研究的介绍部分。

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