内毒素血症小鼠骨骼的变化及机制的初步研究

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内毒素血症小鼠骨骼的变化及机制的初步研究

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毕业论文范文题目：内毒素血症小鼠骨骼的变化及机制的初步研究，论文范文关键词：内毒素血症小鼠骨骼的变化及机制的初步研究
内毒素血症小鼠骨骼的变化及机制的初步研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目前在危重病方面,组织、器官损害机制和防治方法的研究主要集中在心血管、肺、肾脏、血液、免疫系统、干细胞,对感染、休克及脓毒症等危重病情况下骨骼的相关变化及作用机制研究很少。近年来发现,骨细胞是内分泌细胞,其分泌的基质蛋白-骨钙素可下调血糖。更重要的是,骨骼内的骨髓是体内多种造血干细胞及免疫细胞等的重要来源,骨细胞与免疫、干细胞间存在复杂的相互调节,在干细胞分化、动员入血中有重要作用,提示骨骼在全身内环境的稳定中发挥重要作用。事实上,近年来已发现在应激情况下,全身改变特别是神经内分泌系统的变化可影响成骨细胞和破骨细胞功能。内毒素血症是脓毒症,乃至MODS等许多临床危重症发生、发展的重要因素,研究其致病机制非常重要。已有许多关于内毒素引起心肺等重要器官功能损害的研究工作,我们推测在内毒素血症情况下骨骼将会出现改变,并由此可能参与了危重病情况下组织、器官功能的变化过程和转归。目的本研究以内毒素血症小鼠为危重病模型,通过检测内毒素血症动物模型骨骼(骨细胞)及相关基因表达的变化,探讨内毒素对骨骼的影响乃至损害情况及机制,为下一步研究骨骼变化在内毒素血症等重症情况下对机体（文章此处忽略..）其它脏器及全身情况的影响及机制奠定基础。方法1、内毒素血症小鼠模型的制作及评价:腹腔注射LPS的方法制作内毒素血症小鼠模型,LPS按小鼠体重15mg/Kg腹腔注射,将24只小鼠分为8组:正常对照组,LPS处理小鼠4h组,6h组,8h组,12h组,24h组,48h组和72h组,每组3只,采集血清,应用全自动生化分析仪检测小鼠肝肾功能,并取小鼠的心、肝、肺、肾、肠做病理切片,观察小鼠脏器损伤程度,用以评价内毒素血症模型。3只小鼠用于白细胞计数,18只小鼠用于呼吸频率的检测和死亡率的测定。2、内毒素血症小鼠骨骼相关变化的检测:将小鼠分为8组:正常对照组,LPS处理小鼠4h组、6h组、8h组、12h组、24h组、48h组和72h组,每组3只,作HE染色及TRAP染色观察骨骼病理变化,破骨细胞变化。于相应时间点取胫骨,提取骨骼组织的RNA,检测基因TLR4、HIF-1α、caspase3、osteocalcin、cathepsinK的mRNA含量的变化。于正常对照组、6h组、24h组和5d组,每组3只,取骨骼做扫描电镜及透射电镜,观察骨骼细胞的变化。结果1、内毒素血症小鼠模型的评价:内毒素血症小鼠的一周死亡率为22.2%(4/18)。注射内毒素后30min呼吸频率即出现增高（此处忽略..）(P0.05),1h后增高明显(P0.01),于72h恢复正常(P0.05)。LPS4h组白细胞数量与正常组比较显著下降(P0.01),之后逐渐升高,于72h时仍显著升高(P0.05)。与正常对照组比较,LPS组ALT水平4h组显著升高(P0.05),于8h逐渐下降(P0.05),趋于正常。但LPS组BUN水平6h才逐渐升高(P0.05),于8hBUN仍显著增高(P0.05),然后下降,12h趋于正常(P0.05)。2、内毒素血症小鼠骨骼细胞的变化:与正常对照组比较,小鼠于注射LPS后4h破骨细胞开始增加(P0.05),6h显著增多(P0.01),并随着时间逐渐增多。骨骼细胞的扫描电镜显示注射LPS后6h的骨细胞稍有塌陷,树突减少;24h的骨细胞明显塌陷,树突减少;5d的小鼠骨细胞严重塌陷,胞体皱缩成一团,呈凋亡表现。正常的成骨细胞外观饱满,成圆柱体,注射LPS后6h、24h的成骨细胞塌陷,形态由圆柱形变为矮柱状、到5d时成骨细胞变成了扁平状。注射LPS后6h可见破骨细胞体积增大,树突增多,铺展较好并紧贴于骨表面,在LPS处理24h可见破骨细胞在骨表面吸收骨基质出现的小坑,处理5d时可见在骨表面有被破骨细胞吸收后的痕迹。透射电镜显示:正常骨细胞外观饱满,细胞器清晰,注射LPS后6h骨细胞稍有塌陷,染色质边集;注射LPS后24h的小鼠（此处忽略..）骨细胞明显塌陷,低矿化带增宽,细胞器减少;LPS处理5d时骨细胞明显塌陷,低矿化带明显增宽,染色质块状凝集,呈凋亡表现。正常成骨细胞细胞器清晰,细胞核大,核仁明显,可见有大量的粗面内质网,LPS处理6h和24h的小鼠成骨细胞出现细胞器减少,内质网肿胀,5d的成骨细胞细胞器减少,核仁减少。与正常对照比较,LPS处理6h、24h和5d后的小鼠破骨细胞铺展较好,并可见细胞器增多,线粒体肿胀。3、内毒素血症小鼠骨骼中基因的变化:与正常对照组相比,内毒素作用后6h,LPS受体TLR4mRNA表达增加(P0.05),在24h达峰值(P0.01),72h仍处在较高水平(P0.05)。注射LPS4h后与凋亡相关的基因caspase3的表达明显升高(P0.05),24h恢复正常,与正常对照组无显著性差异(P0.05)。注射LPS4h后缺氧反应基因HIF-1α的表达明显升高(P0.05),24h恢复正常,与正常对照组无显著性差异(P0.05)。经统计学分析显示HIF-1α与caspase3的表达有相关性,呈正相关,Peason’s相关系数r=0.71(P0.05)。与正常对照组相比,注射LPS后4h小鼠的骨基质蛋白osteocalcin的mRNA表达量明显降低(P0.01),至12h时几乎无表达,72h的表达仍处在极低的水平(P0.01)。（此处忽略..）注射LPS后4h和6h,破骨细胞分泌的cathepsinKmRNA表达明显升高(P0.05),随后逐渐恢复正常。结论1、本实验成功制作内毒素血症小鼠模型,为后续的实验提供了可靠的模型。2、内毒素对骨骼细胞均产生了影响:导致骨细胞凋亡,并且使破骨细胞数量增多,功能增强,成骨细胞塌陷、功能降低。3、骨骼是内毒素作用的靶器官,骨骼中TLR4、HIF-1α、caspase3基因表达均增高。HIF-1α与caspase3的表达增高有相关性,提示HIF-1α表达的增高可能与炎症情况下骨骼细胞的凋亡有密切关系。

以上为本篇毕业论文范文内毒素血症小鼠骨骼的变化及机制的初步研究的介绍部分。

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