利用RBL-2H3细胞研究双黄连等中药注射液的过敏性

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利用RBL-2H3细胞研究双黄连等中药注射液的过敏性

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毕业论文范文题目：利用RBL-2H3细胞研究双黄连等中药注射液的过敏性，论文范文关键词：利用RBL-2H3细胞研究双黄连等中药注射液的过敏性
利用RBL-2H3细胞研究双黄连等中药注射液的过敏性毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：随着中药注射液(traditionalChinesemedicineinjection,TCMI)使用的增加,其造成不良反应的报道也呈上升趋势,包括皮肤损害、呼吸系统损害、心血管系统损害以及药物热等。过敏反应通常被认为是出现较多,危害较大的不良反应,特别是过敏性休克。但在所谓的过敏反应中实际上也有一部分属于类过敏反应,曾报道穿琥宁注射剂引起的53例过敏反应,经证实其中有11例是类过敏反应,占其过敏反应报道的20.8%。目前GLP对过敏和类过敏没有进行严格区分,TCMI的安全性评价中也没有专门针对类过敏反应进行评价,只在检测TCMI引起动物的过敏反应时附带观察类过敏症状。事实上,类过敏反应与过敏反应不同,前者不一定由过敏原引起,药物成分也可通过直接作用于肥大细胞和嗜碱性细胞,引起活性介质的释放,从而出现类似过敏的一系列症状,通常发生在注射药物后30min左右。2005版《中国药典》规定的TCMI的过敏性实验方法为动物实验,采用豚鼠进行过敏性评价。应该说临床上频繁发生过敏的TCMI都是经过了严格临床前评价的,由此看来现有的检测方法可能不够敏感,或产生了较高的假阴性而不能达到预期目的。目前,GLP对于药物引起的过敏与类过敏反应也没有进行严格区分,因此,优化现有TCMI过敏评价方法,区别类过敏反应并建立相应的评价方法是十分必要的。RBL-2H3细胞是Wistar大鼠嗜碱性白血病细胞株,当受到抗原或者非抗原物质刺激时,可释放含有组胺、白三烯等物质的颗粒,从而产生一系列的生物学效应。因此,本研究通过观察几种常见TCMI对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响,结合临床报道以及动物实验,探讨如何运用RBL-2H3细胞进行双黄连、穿琥宁等TCMI引起过敏以及类过敏反应的研究。研究中还观察了不同浓度吐温80(Tween-80)对RBL-2H3细胞脱颗粒,大鼠类过敏反应以及释放血清组胺的影响,结合（略..）Tween-80残留较多的TCMI引起过敏反应也较多,探讨Tween-80在TCMI引起的过敏反应中的作用。1.实验研究1.1.RBL-2H3细胞培养条件的建立本研究以RBL-2H3细胞为研究对象,首先优化RBL-2H3细胞的生长条件,选择最佳接种浓度。实验过程中采用CCK-8法和MTT法检测细胞增殖情况,并绘制生长曲线。结果显示,RBL-2H3细胞培养于37℃,饱和湿度,5%CO_2培养箱中,以含10%胎牛血清的RPMI1640培养液进行培养时,细胞生长状态良好,细胞形态正常,约两天传代一次,传代比例为1:3。接种密度为1×10~5/mL时,可满足进一步实验要求。根据这一结果,在后续实验中均采用1×10~5/mL这一细胞浓度接种,接种24h后加药。以CCK-8法检测细胞增殖较灵敏,方便快捷,MTT法虽操作复杂,但比较经济,如果其他颜色(除实验过程中生成的甲臜的颜色)对实验结果影响较大,选择MTT法更好。因此在后续实验中,可根据需要酌情选择。1.2.实验所用TCMI的半数抑制浓度(IC50)用不同浓度的TCMI作用于RBL-2H3,37℃,5%CO_2培养箱中培养24h后,用MTT法检测各孔的OD值,然后计算出抑制率(%),最后根据抑制率用IC_(50)统计软件计算出各TCMI的IC_(50)。实验所用的TCMI的IC_(50)分别为脉络宁注射液11.1±3.0μL/mL、血塞通注射液43.6±1.0μL/mL、柴胡注射液59.9±1.5μL/mL、双黄连注射液34.9±6.0μL/mL、穿琥宁注射液57.4±1.2μL/mL、清开灵注射液18.3±4.0μL/mL、香丹注射液1.0±.0.2μL/mL(μL/mL为注射液体积与培养体积之比),后续细胞实验均按此给药。1.3.TCMI引起过敏反应的体外检测方法研究用含抗原特异性抗体的动物血清与RBL-2H3细胞共孵育,24h后,再用该抗原作用于细胞,通过中性红染色法计数脱颗粒的肥大细胞,显色法计算β-氨基己糖苷酶释放率以及酶联免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbent（本文此处忽略..）assay,ELISA)检测培养上清中组胺含量,观察TCMI对致敏RBL-2H3细胞脱颗粒的影响,并比较与临床统计结果的相关性,探讨体外检测TCMI引起过敏反应的意义和方法。结果表明,TCMI可引起致敏RBL-2H3细胞脱颗粒,释放β-氨基己糖苷酶和组胺,这种作用由高到低依次为双黄连注射液,穿琥宁注射液,柴胡注射液,这与临床有关TCMI引起过敏反应的报道基本一致,说明通过模拟体内过敏反应的发生,可以将RBL-2H3细胞作为体外评价中药注射剂的过敏性一种参考方法。1.4.动物实验检测TCMI引起的过敏反应皮内给予豚鼠TCMI以致敏,第14d静脉给予同等剂量的药物作为抗原攻击,观察豚鼠过敏症状并记录,30min后取血并用ELISA检测血清组胺。比较过敏反应中细胞实验与动物实验结果发现,使致敏RBL-2H3细胞脱颗粒程度高的穿琥宁注射液,也可引起豚鼠过敏,释放较多的组胺,而柴胡则较少,这与临床报道是一致的,进一步说明RBL-2H3细胞可望用于评价TCMI引起的过敏反应。1.5.TCMI引起类过敏反应的体外检测方法研究体外培养RBL-2H3细胞,用血塞通等几种TCMI直接作用于细胞,通过中性红染色法计数脱颗粒的肥大细胞,显色法计算β-氨基己糖苷酶释放率,ELISA检测培养上清中组胺含量,观察TCMI对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响,探讨体外检测TCMI引起类过敏反应的意义和方法。以上三种方法所得结果基本一致,即各TCMI引起RBL-2H3细胞脱颗粒的程度依次为血塞通清开灵穿琥宁双黄连香丹脉络宁柴胡,这一结果与临床有关TCMI引起类过敏反应报道结果基本一致。该结果提示,RBL-2H3细胞模型具有评价TCMI致类过敏反应的潜在应用价值。1.6.动物实验检测TCMI引起的类过敏反应按体重分别静脉给予Wistar大鼠和豚鼠以TCMI,观察各组动物的类过敏反应并记录,半个小时后取动物血（文章此处忽略..）清,ELISA方法检测血清组胺含量,并与细胞实验结果进行比较。比较两者发现,细胞实验与动物实验结果基本一致,实验中使用的TCMI引起细胞脱颗粒程度的高低与引起大鼠过敏症状及其血清组胺变化程度一致,由高到低依次为血塞通穿琥宁注射液柴胡注射液,进一步说明检测TCMI致肥大细胞脱颗粒的方法可望用于评价其引起的类过敏反应。比较Wistar大鼠与豚鼠在检测TCMI引起类过敏反应中的实验结果,发现后者症状比前者明显,组间差异较大。但两者血清组胺水平无太大差异,因此,通过观察过敏症状判断中药注射剂所致的类过敏反应时,豚鼠可能更灵敏。比较过敏与类过敏实验发现,引起致敏RBL-2H3细胞脱颗粒、动物和临床过敏反应较多的双黄连以及穿琥宁注射液,在类过敏反应实验中这一作用并不明显,这一研究结果表明,双黄连和穿琥宁注射液引起的过敏反应是有IgE参与的,可能是药物中存在抗原或者半抗原物质,而非药理性引发肥大细胞脱颗粒。1.7.Tween-80引起类过敏反应的研究通过观察不同浓度Tween-80对RBL-2H3细胞脱颗粒以及大鼠过敏反应以及血清组胺的影响,结合残留量不同的各TCMI致过敏反应的不同,探讨Tween-80在TCMI引起类过敏反应中的作用。Tween-80在浓度为0.2～40mg/mL时可引起RBL-2H3细胞脱颗粒,释放β-氨基己糖苷酶和组胺,并呈线性关系,浓度高于112mg/kg时可引起大鼠过敏症状。进一步检测发现Tween-80残留量过高时,TCMI更容易引起RBL-2H3细胞脱颗粒,释放β-氨基己糖苷酶和组胺,这提示中药注射剂中残留过多的辅料Tween-80有可能是引起类过敏反应发生的原因之一。2.结论1.1.现有TCMI存在过敏与类过敏的可能本研究中引起RBL-2H3脱颗粒程度高的TCMI,在临床上也存在较多的过敏以及类过敏反应。1.2.不同TCMI的致敏机制不同本研究结果表明,双黄连和（略..）穿琥宁等注射液引起的过敏反应是有IgE参与的,可能是药物中存在抗原或者半抗原物质,而非药理性引发肥大细胞脱颗粒。而血塞通等TCMI引起的不良反应中有一部分可能属于类过敏反应,应该予以重视。1.3.RBL-2H3细胞可作为体外评价TCMI过敏性的参考方法检测TCMI引起致敏RBL-2H3细胞脱颗粒的方法可用于评价其引起的过敏反应;检测TCMI直接致肥大细胞脱颗粒的方法可望用于评价其引起的类过敏反应。1.4.Tween-80可能是TCMI引起类过敏反应的原因之一Tween-80在浓度为0.2-40mg/mL时可引起RBL-2H3细胞脱颗粒,这一作用呈线性关系,浓度高于112mg/kg时可引起大鼠过敏症状,Tween-80残留量过高的TCMI更容易引起RBL-2H3细胞脱颗粒,这表明TCMI中的辅料Tween-80有可能是引起类过敏反应的原因之一。3.研究意义本论文研究了几种常见TCMI对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响,在结合临床报道以及动物实验的基础上,探讨了如何运用RBL-2H3细胞区分以及评价TCMI引起的过敏以及类过敏反应。研究中还发现,中药注射剂中残留过量的Tween-80有可能是引起类过敏反应发生的原因之一。以上实验为完善TCMI过敏性的评价方法提供了参考,有助于促进中药的临床安全运用。

以上为本篇毕业论文范文利用RBL-2H3细胞研究双黄连等中药注射液的过敏性的介绍部分。

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