伪狂犬病病毒gE糖蛋白主要抗原区的原核表达及gE抗体间接ELISA检测方法的初步建立

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伪狂犬病病毒gE糖蛋白主要抗原区的原核表达及gE抗体间接ELISA检测方法的初步建立

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伪狂犬病病毒gE糖蛋白主要抗原区的原核表达及gE抗体间接ELISA检测方法的初步建立毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：伪狂犬病病毒(Pseudorabies,PRV)是疱疹病毒科(Herpesviridae)α疱疹病毒亚科的成员,可以引起猪、牛、羊及野生动物的伪狂犬病,猪是其主要宿主,伪狂犬病给养猪业造成了巨大的经济损失。鉴于伪狂犬病的巨大危害,欧美许多国家相继启动了“根除计划”。伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白E(glycoproteinE,gE)可作为能鉴别疫苗和感染抗体的诊断抗原,与（略..）相应的基因缺失疫苗配套使用,在该病的根除计划中发挥重要的作用。本研究利用大肠杆菌表达系统表达了伪狂犬病病毒gE主要抗原区,然后利用表达的重组抗原初步建立了gE-ELISA鉴别诊断方法。主要内容如下:参照Genebank发表的伪狂犬病病毒gE基因序列,设计一对引物,通过PCR方法扩增一段包含gE主要抗原表位编码区的564bp的片段,克隆于PMD18-Tvector（此处忽略..）,酶切后插入原核表达载体PET-32a的T7启动子下游,构建的原核表达质粒PET-gE在大肠杆菌BL21中获得了高效表达。SDS-PAGE结果显示,表达产物分子量为38ku,以包涵体形式存在,表达产物经亲和层析法进行纯化。Westernblot分析结果表明,该蛋白能与标准阳性血清发生特异性反应。以在大肠杆菌中高效表达的伪狂犬病病毒gE重组蛋白作为抗原,以辣根过氧化物（本文此处忽略..）酶(HRP)标记的兔抗猪IgG为二抗,初步建立了gE-ELISA鉴别诊断方法。对ELISA各种反应条件进行了优化,并确定了最适工作条件。研究结果表明,重组抗原最适包被浓度为1.7μg/mL,最适包被条件为4℃过夜,血清稀释度为1:40。待检血清和酶标二抗的反应时间均为37℃1h,底物室温显色10min后置酶标仪OD620读数。与猪瘟病毒、日本脑炎病毒、猪呼吸与繁殖综合征病毒、猪细小病（此处忽略..）毒及猪布氏杆菌病的标准阳性血清均呈阴性反应,与猪伪狂犬病标准阳性血清呈阳性反应。批间、批内重复性试验结果变异系数均小于9%。用已建立的间接gE-ELISA方法和国外INGENASA公司的gE抗体检测试剂盒同时对172份猪血清样品进行平行检测,结果表明,建立的间接gE-ELISA方法

以上为本篇毕业论文范文伪狂犬病病毒gE糖蛋白主要抗原区的原核表达及gE抗体间接ELISA检测方法的初步建立的介绍部分。

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