RNA烦扰克制Pin1基因对大肠癌SW620细胞增殖及凋亡才能的影响

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RNA烦扰克制Pin1基因对大肠癌SW620细胞增殖及凋亡才能的影响

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毕业论文范文题目：RNA烦扰克制Pin1基因对大肠癌SW620细胞增殖及凋亡才能的影响，论文范文关键词：RNA烦扰克制Pin1基因对大肠癌SW620细胞增殖及凋亡才能的影响
RNA烦扰克制Pin1基因对大肠癌SW620细胞增殖及凋亡才能的影响毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究背景:大肠癌(colorectalcarcinoma)是重大威胁人类生存的消化体系恶性肿瘤之一,其发病率在西方国度居恶性肿瘤的第2位,在我国居第4位。经临床研究发明,大肠癌的5年存活率较低。因此,早期发明、诊断与医治是进步大肠癌患者生存率的关键。但因为传统医治方法的特异性、敏感性差,以致医治后果欠佳。近年来,跟着分子生物学技巧的疾速发展,大肠癌产生发展的分子机制也获得了冲破性研究。而临床研究表明,细胞的增殖是导致肿瘤发展的重要起因,因此研究大肠癌增殖跟凋亡的分子机制显得尤为重要。Pin1,肽基脯氨酰异构酶(peptidy-prolylcis/transisomerasePPIase)是多肽脯氨酰基顺反异构酶(PPIase)家族成员之一,是一种高度保守、特异的顺反异构酶,可特异性地绑定到磷酸化的脯氨酰前的丝氨酸或苏氨酸位点(Ser/Thr-Pro基序（略..）),催化其产生顺反异构,进而调控底物蛋白的功能、蛋白与蛋白之间的作用,以及亚细胞的定位。研究表明Pin1在人类多种恶性肿瘤中呈高表白状况,与肿瘤的增殖、血管构成、侵袭跟转移有关,因此被称为肿瘤产生、发展的催化分子。进一步研究发明,Pin1在结直肠癌中也浮现过表白,并与结直肠癌的恶性程度明显相干。本研究利用RNA烦扰技巧进一步探讨Pin1对结肠癌SW620细胞的增殖、凋亡才能影响及作用机制。目标:1.构建Pin1基因的RNA烦扰表白载体(pGenesil-1-Pin1,缩写P-shRNA)。2.察看pGenesil-1-Pin1对大肠癌SW620细胞中Pin1基因表白的克制造用。3.探讨Pin1基因表白降落后对大肠癌SW620细胞增殖、凋亡才能的影响,以及相干基因的表白改变情况,并初步分析其可能的分子机制。方法:1.构建Pin1基因有短发夹构造的烦扰表白载体pGenesil-1-Pin1(缩（本文此处忽略..）写P-shRNA)、对比载体pGenesil-1-CON(简写p-CON),经双酶切后,琼脂糖凝胶电泳及DNA测序进行鉴定。2.利用脂质体将重组质粒p-shRNA跟p-CON分辨转染入人大肠癌细胞株SW620,提取总蛋白质,利用Westernblot实验技巧检测其对Pin1基因蛋白表白程度的影响。3.细胞培养计数,绘制成长曲线,利用MTT实验检测SW620细胞转染p-shRNA质粒、p-CON质粒后的增殖才能,采取流式细胞术检测SW620细胞转染后的凋亡情况。4.利用细胞免疫荧光方法检测SW620细胞转染p-shRNA质粒、p-CON质粒后NF-κB/p65的核定位。Westernblot技巧进一步检测NF-κB/p65的核转移的量,以及凋亡相干因子Bcl-2的表白。成果:1.成功构建Pin1基因的RNA烦扰表白载体;经双酶切、琼脂糖凝胶及DNA测序鉴定正确。2.利用脂质体介导重组质粒（本文此处忽略..）转染SW620细胞后,可能克制Pin1蛋白质的表白。p-shRNA/SW620组Pin1蛋白的绝对表白量为0.065±0.005,p-CON/SW620组为0.34±0.027,其48h克制率约为79.3%;统计分析表明,组间差别有统计学意思(P0.05)。提示转染Pin1烦扰质粒可能有效地克制SW620细胞中Pin1基因的表白。3.成长曲线、MTT法、流式细胞术、实验成果表明:转染Pin1烦扰质粒后SW620细胞增殖才能受到克制,而凋亡才能加强。切实验组细胞凋亡率约为12.38%,而阴性对比组细胞凋亡率约为0.065%,进行统计分析,两组差别有统计学意思(P0.05)。4.免疫荧光成果显示:NF-κB/p65重要在细胞核内表白,转染p-shRNA质粒后,p65的荧光表白减弱。Westernblot成果表示:p65在的核转移量减少,同时细胞抗凋亡基因Bcl-2的蛋白表白程度降落.在烦扰组、对比组、空白组p65的蛋白表白量分辨为0.50±0.05、0.96±0.02、0.93±0.02;Bcl-2的蛋白表白量分（本文此处忽略..）辨为0.13±0.016、0.39±0.023、0.38±0.026.论断:1.成功构建Pin1基因的RNA烦扰质粒,并经实验证明:其在大肠癌SW620细胞中可克制Pin1基因的表白;2.Pin1基因表白降落可能有效克制人大肠癌SW620细胞体外恶性增殖,促进凋亡。其可能的作用机制与Pin1基因表白降落降落NF-κB/p65的核内积聚,进而影响其与下游基因的生物学作用有关,为大肠癌基因医治提供了新的思路跟方法。

以上为本篇毕业论文范文RNA烦扰克制Pin1基因对大肠癌SW620细胞增殖及凋亡才能的影响的介绍部分。

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