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幽门螺杆菌对原代培养人胃粘膜细胞胃蛋白酶原蛋白表白的影响

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毕业论文范文题目:幽门螺杆菌对原代培养人胃粘膜细胞胃蛋白酶原蛋白表白的影响,论文范文关键词:幽门螺杆菌对原代培养人胃粘膜细胞胃蛋白酶原蛋白表白的影响
幽门螺杆菌对原代培养人胃粘膜细胞胃蛋白酶原蛋白表白的影响毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:前言幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)是慢性胃炎跟消化性溃疡的重要病因,并且与胃癌的产生关联密切,然而H.pylori的致病机制尚不明白。胃蛋白酶原(pepsinogen,PG)是胃粘膜特异性功能酶-胃蛋白酶的前体,重要来源于胃体底腺的主细胞,可分为胃蛋白酶原A(pepsinogenA,PGA)跟胃蛋白酶原C(pepsinogenC,PGC)两个生物学特点跟免疫学特点不同的亚型。胃粘膜分泌的PG99%进入胃腔,1%进入血轮回。血清PG程度可反应不同部位胃粘膜的状况跟功能。对于H.pylori与血清PG关联的研究目前集中于体内研究,这些研究成果可能受到H.pylori定植部位、PG亚型来源细胞分布差别、免疫反应以及更加复杂的机体调控体系的影响。那么H.pylori对体外培养的人胃粘膜细胞PG蛋白表白的影响毕竟如何?未见文献报道。PGC基因在第7-8外显子间的内含子序列存在100bp的插入-缺失片段长度多态,研究表明PGC基因多态与胃溃疡、胃癌有关,并与H.pylori在这些疾病的产生上存在交互作用,但其确切(本文此处忽略..)机制尚不明白。那么H.pylori对不同PGC基因多态型人胃粘膜细胞PG蛋白表白的影响如何?目前尚不明白。体外实验中利用的细胞大多是长生化的细胞系,是因为其存在易获取、培养省时省力、可能无穷传代等长处,然而细胞系长时光的培养已经很大程度川改变了其生物学特点,这一点是细胞系作为研究模型以来始终存在的困扰性问题。原代培养细胞补充了细胞系的不足,因为其刚离体,生物学特点未产生很大变更,仍存在二倍体遗传物性,最濒临跟反应体内成长特点。胃粘膜细胞原代培养是近三十年来尤其是上世纪八九十年代因为基本研究跟临床医治的须要以及细胞培养技巧的发展而发展起来的,其来源波及鼠、兔、犬、人等多个种属。通过对原代培养胃粘膜上皮细胞的评估,发明其体外功能与体内胃上皮细胞有很多类似之处。H.pylori是胃粘膜的伤害因子,是胃粘膜病变的始动因素,在细胞程度上研究H.pylori在胃疾病产活力制中的作用,前提是可能获得与人体胃粘膜伤害非常相近的H.pylori引诱伤害模型,然而目前还不这样幻想的实验模型。本研究拟通过H.pylori与原(文章此处忽略..)代培养的人胃粘膜细胞共培养察看H.pylori对胃粘膜细胞的伤害作用,树破H.pylori引诱的原代培养人胃粘膜细胞伤害模型,初步探讨H.pylori对原代培养的人胃粘膜细胞及不同PGC基因多态型人胃粘膜细胞PG蛋白表白的影响,以期为研究H.pylori伤害胃粘膜细胞及细胞抗H.pylori伤害的机制提供实验根据。目标树破H.pylori引诱的原代培养人胃粘膜细胞伤害模型;明白H.pylori对原代培养的人胃粘膜细胞PG蛋白表白的影响;明白H.pylori对不同PGC基因多态型人胃粘膜细胞PG蛋白表白的影响。方法本研究采取脑心浸液琼脂培养基进行H.pylori复苏培养;采取原代细胞培养技巧进行人胃粘膜细胞的培养;采取细菌与细胞共培养方法,通过倒置显微镜察看细胞伤害的状况学改变,通过乳酸脱氢酶(lacticdehydrogenase,LDH)试剂盒检测细胞外LDH活力;采取序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR)方法检测PGC基因多态型,采取酶联免疫吸附实验(Enzyme-linkedimmunosorbentass(本文此处忽略..)ay,ELISA)方法检测细胞培养上清中PG蛋白含量,打算加菌前后PG蛋白表白变更率=(加菌后PG蛋白表白量-加菌前PG蛋白表白量)/加菌前PG蛋白表白量。成果1.H.pylori引诱原代培养人胃粘膜细胞伤害模型的树破①畸形胃粘膜细胞的原代培养胃粘膜细胞接种第2天细胞呈团簇状成长,团簇越多越密集,细胞增殖越快、数量越多;第3天细胞增殖敏捷,以细胞簇为核心向外周成长,与附近的细胞群相连成片;第4天细胞铺满皿底约70%,细胞成长状况良好,单层贴壁成长,呈菱形或多边形,核大呈卵圆形。②H.pylori引诱原代培养人胃粘膜细胞伤害作用的察看H.pylori与胃粘膜细胞以100:1的比例共培养6小时造成了细胞的伤害:细胞缝隙扩大,连接松弛,细胞名义肿胀、不规矩,细胞轮廓变含混,细胞四周碎片增多,细胞膜、核膜变毛糙,可见空泡变性,细胞状况产生伤害改变。LDH活力测定成果显示6'hLDH活力远高于3'h跟对比组,而与9'h基本相同。2.H.pylori对原代培养人胃粘膜细胞PG蛋白表白的影响加菌组胃粘膜细胞PGA蛋白表白(247.0±104.5ug/1L)高于对比组(239.7±107.8ug(略..)/1L,P=0.90),PGC蛋白表白(43.6±53.3ug/1L)高于对比组(31.2±23.6ug/1L,P=0.56)。各组间差别无统计学意思。3.H.pylori对不同PGC基因多态型人胃粘膜细胞PG蛋白表白影响携带PGC等位基因310的原代培养胃粘膜细胞加菌前后PGA蛋白表白变更率(0.20±0.21)高于其余型(-0.01±0.07,P=0.11),PGC蛋白表白变更率(0.36±0.22)高于其余型(0.23±0.71,P=0.73)。各组间差别无统计学意思。论断1.成功树破H.pylori引诱的原代培养人胃粘膜细胞伤害模型。2.H.pylori可能上调原代培养的人胃粘膜细胞PGA、PGC蛋白表白。3.H.pylori对不同PGC基因多态型人胃粘膜细胞PG蛋白表白的影响不同,携带PGC等位基因310的胃粘膜细胞PG蛋白表白受H.pylori影响强于其余型。


以上为本篇毕业论文范文幽门螺杆菌对原代培养人胃粘膜细胞胃蛋白酶原蛋白表白的影响的介绍部分。
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