促红细胞生成素对大鼠脑出血灶周组织Bcl-2、Bax的表白与神经元凋

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促红细胞生成素对大鼠脑出血灶周组织Bcl-2、Bax的表白与神经元凋

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毕业论文范文题目：促红细胞生成素对大鼠脑出血灶周组织Bcl-2、Bax的表白与神经元凋，论文范文关键词：促红细胞生成素对大鼠脑出血灶周组织Bcl-2、Bax的表白与神经元凋
促红细胞生成素对大鼠脑出血灶周组织Bcl-2、Bax的表白与神经元凋毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目标脑出血(ICH)是一种常见且致命的卒中类型,在生存者中常常遗留重大神经功能缺损,目前有效医治方法仍然有限。促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是一个调节血细胞生成的细胞因子,近来发明EPO及其受体在中枢神经体系中广泛存在,二者结合后存在促进神经成长、神经养分跟神经保护作用,但其具体作用机制较复杂,仍然不非常明白。本研究采取自体血打针方法制备大鼠ICH模型,察看ICH后神经细胞凋亡与Bcl-2、Bax表白的变更,并探讨EPO的干涉作用及机制。材料与方法1、动物分组110只Wistar雄性大鼠,体重220～270克,随机分成四组:畸形组、假手术组、ICH对比组、rhEPO医治组,后3组分为6h跟12h、24h、48h、72h、120h、168h、7个亚组,每组5只。2、ICH模型的制备参照Xue跟Yang的方法,大鼠称重后给予10%水合氯醛腹腔打针麻醉(300mg/kg),随后俯卧位固定于大鼠脑破体定位仪上,惯例备皮消毒,沿头皮正中切开一长约10mm纵切口,切开骨膜,钝性分别裸露前囟,调剂破体定位仪,用微型手钻在定位处钻始终径0.5mm的小孔,用微量打针仪取大鼠自体不凝血50ul,注入左侧大鼠尾状核部位,按20ul╱min的速度迟缓匀速注入(3分钟内实现)。注血结束后留针5min,迟缓退针,缝合切口。假手术组除不（本文此处忽略..）注血外,其余步骤同上。术后5min医治组给予rhEPO按3000UI╱Kg(用生理盐水稀释成0.5ml)腹腔打针。模型组及假手术组术后相应时光给予生理盐水0.5ml腹腔打针。畸形组大鼠不予手术及给药。3、脑标本采集与组织学检查不同组别大鼠用10%水合氯醛(300mg/kg)腹腔打针麻醉后,剪开胸腔及右心耳,用一钝针经左心室插至主动脉起始部,顺次灌注4℃生理盐水300ml,4%多聚甲醛400ml后,断头取脑。用4%多聚甲醛固定24～48h后,以针孔为核心,取厚为3mm的脑组织标本。惯例脱水、透明及浸蜡包埋,在切片机上持续切出片厚为5微米的切片,HE染色,光镜察看组织学变更,数码相机照相。4、原位细胞凋亡检测标本切片惯例脱蜡至水→新鲜配制3%H_2O_2室温孵育10min→新鲜稀释ProteinaseK37℃消化10min→加标记液,37℃标记2h→加封闭液室温30min→加生物素化抗地高辛抗体37℃反应30min→加SABC,37℃反应30min→DAB显色→苏木素轻度复染→脱水、封片→显微镜下察看。细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞,即凋亡细胞。每张切片在出血侧皮层计数5个高倍镜视线(×400),取均匀值,为该切片凋亡细胞数。5、Bcl-2、Bax免疫组织化学检测标本切片惯例脱蜡至水→3%H_2O_2室温孵育15min→0.1%TBS中行微波抗原修复10min→畸形山羊血清室温孵育20m（文章此处忽略..）in→滴加兔抗大鼠Bcl-2、Bax多克隆抗体(1:400)→4℃过夜→滴加生物素标记二抗37℃孵育20min→滴加辣根过氧化物酶标记链霉卵白素→37℃孵育20min→DAB显色→水洗、复染、封片、光镜下察看。Bcl-2、Bax阳性细胞胞浆/胞膜被染成棕黄色,每张切片在出血侧皮层计数5个高倍镜视线(×400),取均匀值为该切片Bcl-2、Bax阳性细胞数。6、统计学处理采取国际统计软件SPSS13.0处理数据,所有成果用均数±标准差((?)±s)表示,多样本比较用单因素方差分析;假如差别存在明显性,则进行LSD-t测验,P＜0.05为明显性差别,有统计学意思。Bax蛋白表白与细胞凋亡,Bax/Bcl-2与细胞凋亡,采取Pearson直线相干分析,P＜0.05为明显性差别。成果1、HE染色畸形组皮层无坏逝世细胞,神经元数量多,胞浆丰富,核质细,核仁明白;假手术组在针道处可见坏逝世细胞,数量极少。ICH对比组在术后皮层出血核心无神经元,仅见少量胶质细胞,细胞间质空泡样改变;出血边沿区神经元稀少,细胞缝隙增大,细胞缩小,胞膜与四周分界明白,并可见大量变性及坏逝世的神经细胞,表示为胞体皱缩,核固缩深染,核仁消散。rhEPO医治组出血核心区变小,边沿区神经细胞变性坏逝世减少,多数存活细胞状况绝对畸形,病变较轻。I（略..）CH对比组及rhEPO医治组术后6h血肿四周皮质可见大量变性及坏逝世的神经细胞,并持续增多,72h达到顶峰,120h变性及坏逝世的神经细胞降落,各时光点rhEPO医治组与ICH对比组比较病变减轻。2、脑出血及灶围组织细胞凋亡情况畸形组大鼠大脑皮质未见TUNEL阳性细胞,假手术组在针道处大脑皮质有散在TUNEL阳性细胞。ICH对比组及rhEPO医治组术后6h血肿四周皮质TUNEL阳性细胞已明显增加,并持续增多,72h达到顶峰,120hTUNEL阳性细胞数降落,各时光点与假手术组比较差别有极明显性(P＜0.01)。rhEPO医治组6h～168hTUNEL阳性细胞数明显少于同时点ICH对比组(P＜0.01)。3、各组Bcl-2阳性细胞表白的比较畸形组未见Bcl-2阳性细胞,假手术组在针道处大脑皮质可见少量Bcl-2阳性细胞表白。ICH对比组及rhEPO医治组术后6h血肿四周皮质Bcl-2阳性细胞已明显增加,并持续增多,72h达到顶峰,120hBcl-2阳性细胞数降落,各时光点与假手术组比较差别有极明显性(P＜0.01)。rhEPO医治组术后6h～168hBcl-2阳性细胞数较ICH对比组明显增加(P＜0.01)。4、各组Bax阳性细胞表白的比较畸形组未见Bax阳性细胞,假手术组在针道处大脑皮质可见少量Bax阳性细胞表白。ICH对比组及rh（略..）EPO医治组术后6h血肿四周皮质Bax阳性细胞已明显增加,并持续增多,72h达到顶峰,120hBax阳性细胞数降落,各时光点与假手术组比较差别有极明显性(均P＜0.01)。rhEPO医治组术后6h～168hBax阳性细胞数较ICH对比组明显减少(P＜0.01)。5、经Pearson直线相干分析Bax蛋白表白与细胞凋亡呈正相干(r=0.889,P＜0.01),Bax/Bcl-2与细胞凋亡呈正相干(r=0.423,P＜0.01)。论断凋亡机制参加了脑出血后继发性伤害的过程,促红细胞生成素可能通过上调Bcl-2蛋白表白,下调Bax蛋白表白,对脑出血后神经伤害起保护作用。

以上为本篇毕业论文范文促红细胞生成素对大鼠脑出血灶周组织Bcl-2、Bax的表白与神经元凋的介绍部分。

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