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不同乳蛋白调控区领导hLF基因在转基因小鼠中表白程度的研究

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毕业论文范文题目:不同乳蛋白调控区领导hLF基因在转基因小鼠中表白程度的研究,论文范文关键词:不同乳蛋白调控区领导hLF基因在转基因小鼠中表白程度的研究
不同乳蛋白调控区领导hLF基因在转基因小鼠中表白程度的研究毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:转基因动物乳腺生物反应器的研究已经成为生物工程范畴研究的热点之一;成为高效、高品质出产昂贵生物活性蛋白的有效道路之一;利用乳腺生物反应器出产人的重组蛋白较早期的细菌表白、真核细胞表白体系有产品活性高、本钱低的长处,因此某些重组蛋白更合适利用乳腺生物反应器来出产。外源基因在转基因动物乳腺中特异性表白是转基因动物乳腺生物反应器的基本目标。有很多生物活性蛋白基因在乳蛋白调控序列的领导下已经在转基因动物乳腺中表白,其中利用较多的调控元件有牛αs1-酪蛋白、山羊β-酪蛋白、山羊β-乳球蛋白跟小鼠的乳清酸蛋白等。只管已有利用这些调控序列实现乳腺特异性表白成功的事例,但大多数实验研究中,乳腺特(此处忽略..)异性表白的成功率低,乳汁中的表白程度较低。本研究选用山羊BLG、山羊β-酪蛋白跟牛αs1-酪蛋白三种不同乳蛋白调控序列构建人乳铁蛋白乳腺特异表白载体,制备转基因小鼠并在小鼠乳腺内表白目标蛋白,从而在个体表白程度上探讨不同调控序列对外源基因表白程度的影响,筛选高程度表白载体。本研究选用山羊β-乳球蛋白作为调控元件,构建由山羊BLG5’+CMV+hLFcDNA+Neor+山羊BLG3’组成的乳腺特异表白载体BCL。选用山羊β-酪蛋白作为调控元件,构建由鸡β-globin+山羊β-casein5’+CMV+hLFcDNA+山羊β-casein3’组成的乳腺特异性表白载体PMH。选用牛αs1-酪蛋(此处忽略..)白作为调控元件,构建由牛αs1-casein5’+CMV+hLFcDNA+牛αs1-casein3’组成的乳腺特异表白载体ACF。通过原核显微打针法制备转基因小鼠,来验证本实验构建的乳腺特异性表白载体的有效性。将BCL质粒用SalI.与NotI限度性内切酶消化,回收纯化约10.6kb的表白载体片段,通过原核显微打针法导入小鼠受精卵雄原核,成果获得65只G0代小鼠,经PCR检测,其中6只小鼠整合有外源基因(♀19#、♀48#、♀59#、♀62、♂11#、♂23#)。将PMH质粒用SalI与NotI限度性内切酶消化,回收纯化约19.1kb的表白载体片段,通过原核显微打针法导入小鼠受精卵雄原核,成果获得56只G0代小鼠,经PCR检测,其中5只小鼠整合有外源(文章此处忽略..)基因(♀18#、♀27#、♀28#、♀31#、♂30#)。将ACF质粒用SalI.与NotI.限度性内切酶消化,回收纯化约10.8kb的表白载体片段,通过原核显微打针法导入小鼠受精卵雄原核,成果获得22只G0代小鼠,经PCR检测,其中3只小鼠整合有外源基因(♀4#、♀13#、♂8#)。采取酶联免疫法(ELISA)跟蛋白印迹(WesternBlot)对原代转基因小鼠及的乳汁进行目标蛋白的表白检测。ELISA检测成果表明,BCL转基因小鼠G0乳汁中人乳铁蛋白表白均为阳性,其中均匀表白量约为5.874mg/mL;PMH转基因小鼠G0乳汁中人乳铁蛋白表白均为阳性,其中G0代均匀表白量约为3.556mg/mL;ACF转基因小鼠G0乳汁中人乳铁蛋白表白均为阳性,其中G0代均匀表白量约为3.(本文此处忽略..)251mg/mL。WesternBlot成果表明,BCL转基因小鼠、PMH转基因小鼠跟ACF转基因小鼠的乳汁中所表白的目标蛋白的分子量大小与人乳铁蛋白标准品基本一致(约78kD)。本实验成功构建了可能领导目标基因在动物乳腺中高效表白的载体BCL、PMH跟ACF,而且咱们所构建的人乳铁蛋白乳腺特异性表白载体存在很好的乳腺组织表白特异性,为下一步树破高表白的转基因山羊乳腺生物反应器奠定了基本。


以上为本篇毕业论文范文不同乳蛋白调控区领导hLF基因在转基因小鼠中表白程度的研究的介绍部分。
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