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转染Brn2、Ascl1、Mytll基因的BMSC在体外分化为神经元样细胞的初

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毕业论文范文题目:转染Brn2、Ascl1、Mytll基因的BMSC在体外分化为神经元样细胞的初,论文范文关键词:转染Brn2、Ascl1、Mytll基因的BMSC在体外分化为神经元样细胞的初
转染Brn2、Ascl1、Mytll基因的BMSC在体外分化为神经元样细胞的初毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:[目标]脑卒中是神经体系的常见病、多发病,其致残率跟病逝世率均很高。脑卒中医治的关键是重建神经通路,重建神经通路的前提是有新生神经细胞的产生。成年哺乳动物脑内神经干细胞的发明,给脑卒中的医治带来了新的曙光。但神经干细胞的组织来源始终是这一研究范畴最棘手的问题。骨髓基质干细胞(bonemarrowstromalcell,BMSC),是存在于骨髓基质中一种成体干细胞,来源于中胚层,存在很强的自我增殖跟多向分化才能,可能分化为多种不同的组织细胞,是组织工程学研究中的一种幻想种子细胞。目前国内外研究报道骨髓基质干细胞在体内外可被引诱分化神经细胞,如骨髓基质干细胞可能被化学物质如视黄酸、β-巯基(此处忽略..)乙醇,中药如黄芩甙、天麻等引诱分化为神经细胞。然而利用转录因子Brn2、Asc11、Mytll基因对骨髓基质干细胞引诱分化的研究在国内尚属空白。Brn2又称为POU3F2,是POU转录因子家族之一,重要在中枢神经体系当中表白。有研究表明,Brn2可调节神经体系的基因表白,在哺乳动物的神经产生方面发挥侧重要的作用。Ascl1基因的编码产物是碱性螺旋-环-螺旋(BHLH)转录因子家族之一。Ascll在神经定型、分化,以及嗅觉与自主神经元的产生方面发挥侧重要的作用。Mytll基因又称为Nzfl基因,可特异性结合于视黄酸反应原件,表示出转录活化作用。Mytll基因可能与神经体系与脑垂体的基因表白调控有关。因此(文章此处忽略..),本研究拟通过克隆并构建一个含有Brn2、Asc11、Mytll基因的慢病毒表白载体,初步探讨转染Asc11、Mytll基因的骨髓基质干细胞在体外分化为神经细胞的情况,为下一步进行骨髓基质干细胞的神经移植或基因医治打下基本。l方法]1.用Percol1淋巴细胞分别液分别出大鼠骨髓基质干细胞,并用含20%(体积分数)胎牛血清的DMEM培养液培养,胰酶消化传代,扩增大鼠骨髓基质干细胞。2.采取PCR技巧克隆出长分辨为696bp、1338bp及3558bp的Brn2.Ascl1、Mytll基因部分序列,利用Gateway克隆技巧构建pLV.EX3d.null-CMVmAscl1/E2A/mBrn2/F2A/mMytl1质粒。经酶切、PCR.DNA序列(此处忽略..)分析鉴定断定载体构建无误。3.取第四代、第六代BMSC,用慢病毒转染法介导Brn2、Ascll、Mytl1基因进入到骨髓基质干细胞内。察看细胞状况的改变。[成果]1.大鼠BMSC的分别培养用Percol1淋巴细胞分别液对大鼠骨髓作密度梯度离心,所得细胞为比较均一的球形单个核细胞,台盼兰染色细胞活力达99%。接种培养10-14天后,细胞贴满培养瓶瓶底,进行细胞的首次传代。传3-4代后,可能构成较典范的BMSC,细胞大而扁,呈梭形、三角形、多角形,折光性差,破体感不强。2.Brn2、Ascll、Mytl1基因片段经测序鉴定,克隆基因序列与GenBank收录小鼠Brn2(NC_000070.5)、Ascll(NC_000076.5)、Mytll(NC000078.5)完全同源(略..)。并以此成功构建Brn2、Ascll、Myt11基因的真核表白载体pLV.EX3d.ni11-CMVmAscl1/E2A/mBrn2/F2A/mMytl1.3.BMSC转染带有Brn2.Ascl1.Mytl1基因的表白载体后,可能察看到胞体紧缩,折光性加强,并伸出较长轴突跟树突样崛起,状况类似神经细胞。[论断]转染的Brn2.Ascl1.Mytl1基因的骨髓基质干细胞在体外可能分化为神经元样细胞。


以上为本篇毕业论文范文转染Brn2、Ascl1、Mytll基因的BMSC在体外分化为神经元样细胞的初的介绍部分。
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