小鼠胎肝干细胞经化学试剂引诱向心肌细胞方向分化的研究

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小鼠胎肝干细胞经化学试剂引诱向心肌细胞方向分化的研究

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毕业论文范文题目：小鼠胎肝干细胞经化学试剂引诱向心肌细胞方向分化的研究，论文范文关键词：小鼠胎肝干细胞经化学试剂引诱向心肌细胞方向分化的研究
小鼠胎肝干细胞经化学试剂引诱向心肌细胞方向分化的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究背景:冠状动脉粥样硬化性心脏病,特别是急性心肌梗逝世,是重大迫害人类健康的常见病,多发病。目前固然能在发病4-6小时内通过及时溶栓或参与医治以抢救濒临逝世亡的心肌组织,但因为绝大部分患者就诊时缺血心肌已经坏逝世。此时再灌注医治只能避免梗逝世面积的扩大,而无奈抢救已经坏逝世的心肌。如何更有效地医治冠心病,成为医学研究的焦点。而早先的研究成果,为患者带来了盼望。传统观点认为,心肌细胞出生后即向终末分化,不可能复制,并且成年心肌组织中不储存的心肌祖细胞,因此心肌受损后心肌细胞不能再生,被疤痕组织代替,终极导致心脏的紧缩功能受损[1]。然而目前很多研究成果[2]给咱们带来观点上的更新:其一,心脏不是终末分化器官,心肌中有75%的细胞是单核细胞,,25%是双核细胞,这一比例不受疾病、年纪、性别、心肌肥大及心肌缺血等影响。其二,急性心肌伤害促进心肌细胞代偿性增殖。固然有研究显示:急性心肌梗逝世后也有少量心肌细胞产生决裂增生[3]。但决裂的细胞数量很少,修复心肌组织的才能有限。因此,细胞移植,这一旨在增加心肌细胞数量标方法可能是有效医治心肌伤害的最佳抉择。目前研究多集中在胚胎干细胞、骨骼肌干细（文章此处忽略..）胞、骨髓间充质干细胞等各类干细胞的心肌移植,并屡有移植细胞在体内存活分化,修复梗逝世心肌,改良心脏功能的研究报道。然而要将上述研究终极用于临床,却面临诸多问题。胚胎干细胞是来源于哺乳动物早期胚胎的内细胞团或桑椹胚的二倍体细胞,从植入子宫内膜前的囊胚中提取,在体外分别培养而树破的细胞系。其明显特点是可能在体外长期保持不分化状况下的增殖才能,并仍具备分化为三胚层细胞的牢固发育潜能,有“万能细胞”之称[4]。近年有些国度已解除胚胎干细胞研究的禁令,为其打扫了社会跟伦理方面的妨碍。但获取受限跟移植排斥反应是限度其发展的瓶颈。骨骼肌干细胞存在能耐受缺血环境;移植后很快分化成存在紧缩性的骨骼肌等特点。但其数量极少,且与年纪增加负相干,分别纯化的技巧难度大。而最大的缺点在于骨骼肌干细胞并不能与受体心肌细胞构成闰盘连接,不能整合到受体心肌细胞中构成生感性功能合胞体,导致骨骼肌干细胞移植后往往产生心室节律混乱,使其利用价值受到不少学者质疑。骨髓间充质干细胞存在取材便利、体外分别纯化绝对简单、易扩增等特点;同时因为它们存在独特的免疫耐受性(其起因可能是缺乏Ⅱ型HLA跟免疫共刺激因子B7[（文章此处忽略..）5]),可能在异种异体环境中存活,而不被受体免疫体系所排斥。所以骨髓间充质干细胞是用于心肌移植的上风细胞之一,被广泛关注[6,7]。胎肝干细胞(Embryonichepaticstemcells,EHSCs)是近年逐步被关注的一类间充质干细胞细胞。有学者[8]认为胚胎肝脏发育早,胎肝干细胞可能存在比骨髓干细胞更强的增殖分化才能跟更低的免疫原性跟免疫活性。有研究者已就其向类心肌细胞方向分化做出了初步探讨[9,10]。胎肝干细胞有望用于心肌移植的上风细胞之一。研究目标:1.优化小鼠EHSCs的分别、纯化、扩增的方法;2.比较不同胎龄的EHSCs生物学性状,遴选出获得小鼠EHSCs的合适时代;3.通过体外引诱分化实验懂得EHSCs是否存在分化为类心肌细胞的潜能;4.比较不同的引诱前提下,EHSCs向类心肌细胞方向的分化情况。方法与论断:第一部分:探讨小鼠EHSCs分别、纯化、扩增方法,比较不同胎龄的小鼠EHSCs的生物学性状。采取胶原酶加EDTA消化法跟差速贴壁法分别不同胎龄的小鼠EHSCs,用含15%优等胎牛血清的L-DMEM培养液培养,通过反复传代对EHSCs进行纯化跟扩增培养。成果提示:13.5d胎龄（此处忽略..）组EHSCs状况均一,成长状况良好,干细胞特点明显,是绝对原始的干细胞。随胎龄增加,16.5d胎龄组跟19.5d胎龄组EHSCs状况差别渐大,成长状况渐次,逐步向存在肝细胞跟胆管细胞标记的双显型干细胞方向过渡。论断:1.13.5d胎龄的EHSCs,是绝对原始的干细胞,可能存在更广泛的分化潜能。2.通过上述方法,可获得数量可观,性质牢固的EHSCs。第二部分:探讨不同的引诱前提下,EHSCs向心肌细胞方向的分化情况。取3-4代细胞以1.5×10~4/cm~2密度接种于培养板上。当细胞濒临80%-90%融合时,用不同浓度的引诱剂引诱细胞24h,而后置于37OC,5%CO_2,20%O_2,饱跟湿度的孵箱中培养。倒置显微镜下察看细胞状况变更,发明在下述前提下细胞产生了向心肌细胞方向的分化:引诱剂为5-aza5μmol/L+DMSO0.8%,孵育时光为24h,培养液是含有15%FCS、1%非必须氨基酸、1%左旋谷氨酸的L-DMEM培养基。培养前提是37OC,5%CO_2,20%O_2,饱跟湿度的孵箱。成果提示:引诱3周后,分化细胞呈小圆形,存在彼此凑集构成球形细胞团构造的趋势;引诱后第4周,细胞免疫组化染色提示转化细胞表白心肌特异性肌钙蛋白T(troponinT,TnT)跟α-肌动蛋白(α-ac（略..）tin)。论断:1.小鼠EHSCs存在向心肌细胞方向分化的潜能;2.不同种属来源的细胞产生分化的时光跟过程并不完全雷同,转化为成熟心肌细胞所需时光也不同。总结:1.利用改进的差速贴壁法,可能从胎肝中分别出存在良好贴壁才能的干细胞群,方法较为简单易行。2.胎龄为13.5d的小鼠胎肝,单位分量的胎肝中含有更多的存在构成集落才能的干细胞。3.胎龄为13.5d的小鼠胎肝干细胞处于绝对原始的未分化阶段。4.小鼠EHSCs在5-aza跟DMSO结合引诱的情况下在体外可向类心肌细胞方向分化。5.引诱剂组合5-aza5μmol/L+DMSO0.8%能引诱EHSCs在体外向心肌细胞方向分化,加大引诱剂剂量并不能进步引诱效力。6.引诱剂组合5-aza5μmol/L+DMSO0.8%引诱EHSCs在体外向心肌细胞方向分化的公道作用时光为24h,延长引诱剂的作用时光,并不能进步引诱效力。

以上为本篇毕业论文范文小鼠胎肝干细胞经化学试剂引诱向心肌细胞方向分化的研究的介绍部分。

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