羊布鲁氏菌病iELISA抗体检测方法的树破及布鲁氏菌omp28基因的克

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羊布鲁氏菌病iELISA抗体检测方法的树破及布鲁氏菌omp28基因的克

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羊布鲁氏菌病iELISA抗体检测方法的树破及布鲁氏菌omp28基因的克毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：布鲁氏菌病(Brucellosis)是一种重要的人兽共患感染性变态反应疾病,存在重要的公共卫生学意思。免疫接种跟正确诊断是有效防控该病的两大重要手段。目前布鲁氏菌病的诊断方法大都是基于LPS抗原树破的,本研究试图树破一种基于LPS抗原,用于羊布鲁氏菌病抗体检测的iELISA方法。为了进步iELISA检测方法的特异性跟灵敏性,本研究对OIE手册介绍的热酚水法提取的布鲁氏菌粗制LPS从纯度、产率、活性等方面比较了冷甲醇积淀法、硫酸铵积淀法、酶消化处理法对LPS的纯化后果,成果证明酶消化处理的纯化后果最好。用断（此处忽略..）定的LPS提纯工艺纯化的LPS作为抗原树破羊布鲁氏菌病iELISA抗体检测方法,并对相干反应前提进行了优化,以方阵滴定法对LPS抗原的浓度跟待检血清的稀释倍数进行滴定,断定LPS的最佳包被浓度为0.17μg/ml,待检血清的最佳稀释倍数为1：100。通过把持单一变量法对封闭液、封闭时光、待检血清的反应时光、酶标记兔抗羊IgG抗体的稀释倍数及反应时光、显色时光等其它影响反应的因素进行了优化。终极断定相干前提为抗原4℃包被8h,0.4%明胶封闭30min,待检血清37℃孵育l0min,HPR标记兔抗羊IgG抗体稀释40000倍,37℃孵育10min,TMB（文章此处忽略..）25℃显色10min。对385份已知背景的羊血清的检测成果统计,用ROC曲线进行分析,断定iELISA检测成果的断定标准为：S/P≥0.2为阳性,S/P0.2为阴性。根据成果的断定标准,断定检测体系成破的前提为强阳性对比血清O.D.450mm0.83,弱阳性对比血清O.D.450mm0.35,阴性对比血清O.D.450mm0.15。对所树破的iELISA的敏感性、特异性、反复性(批间反复性跟批内反复性)、牢固性、合乎率等进行评估。成果表明,该方法敏感性高,比SAT跟RBPT灵敏度高60-150倍；特异性好,可有效的区分布鲁氏菌与大肠杆菌O：157跟都柏林沙门氏菌的穿插感染；反复（文章此处忽略..）性良好,批内反复跟批间反复性实验成果变异系数均小于10%；牢固性良好,保存期实验成果显示抗原包被板在4℃保存11个月检测成果牢固；对来自不同地区的385份临床血清进行检测并与RBPT跟SAT成果比较,成果阳性合乎率98.41%,阴性合乎率为96.65%。对1932份临床血清样品进行检测,并与RBPT进行比较,总合乎率为91.7%,大量文献报道及本研究成果显示,基于LPS抗原检测布鲁氏菌IgG抗体的检测方法不能与小肠结肠炎耶尔森菌0：9IgG抗体辨别。OMP28是布鲁氏菌的重要抗原蛋白,而小肠结肠炎耶尔森菌中不含有此蛋白。为开发一种可区分布鲁氏菌与小肠结肠炎耶尔森（文章此处忽略..）菌0：9感染的诊断方法,本研究克隆了不同布鲁氏菌的omp28基因并通过序列比对以及在GenBank中BLAST搜查,成果显示,omp28基因在不同种布鲁氏菌中的类似性达到99%以上,本研究还构建了pET32a-omp28表白载体,并对重组表白载体表白产物进行了鉴定跟蛋白的纯化,为进一步研究奠定了丛础。

以上为本篇毕业论文范文羊布鲁氏菌病iELISA抗体检测方法的树破及布鲁氏菌omp28基因的克的介绍部分。

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