Kupffer细胞在血红素氧合酶-1保护大鼠移植肝缺血再灌注伤害中的

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Kupffer细胞在血红素氧合酶-1保护大鼠移植肝缺血再灌注伤害中的

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毕业论文范文题目：Kupffer细胞在血红素氧合酶-1保护大鼠移植肝缺血再灌注伤害中的，论文范文关键词：Kupffer细胞在血红素氧合酶-1保护大鼠移植肝缺血再灌注伤害中的
Kupffer细胞在血红素氧合酶-1保护大鼠移植肝缺血再灌注伤害中的毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：自1963年Starzl履行首例临床肝移植手术以来,肝移植已成为当今医治终末期肝病的独一有效方法。然而,同其它大器官移植一样,供肝离体后的缺血再灌注伤害乃是面临的重大困难之一,常导致手术后供肝原发性无功能,被认为是肝移植失败的重要起因。移植肝脏经历冷缺血再灌注伤害后,会产生大量的氧自由基,促炎性细胞因子等加重肝脏的伤害,导致肝细胞坏逝世跟器官功能衰竭。氧自由基是器官经历缺血再灌注后加重组织伤害的最早跟最重要的成分之一,它们重要来源于细胞内黄嘌呤氧化酶的氧化作用,Kupffer细胞跟多形核白细胞的缺氧刺激。多形核白细胞跟Kupffer细胞产生的大量氧自由基导致内皮细胞伤害,最后使微血管完全性丧失跟血流减少(无复流景象)。然而,到目前为止仍然不一种有效的处理方法来防备肝脏缺血再灌注伤害。研究发明,血红素氧合酶-1(HO-1)对肝脏缺血再灌注伤害存在保护作用,但其具体的作用机制仍不非常明白。已发明的血红素氧合酶体系有三种同工酶,HO-1为引诱型,又称为热休克蛋白32;HO-2为非引诱型,（本文此处忽略..）又称为构造型;HO-3与HO-2相干但含量较少。HO-1是一种血红素降解的催化酶跟限速酶,可将血红素分解成一氧化碳(CO)、胆绿素(BV)跟游离铁(Fe~(2+))。胆绿素被胆红素还原酶进一步还原为胆红素,游离铁参加细胞内代谢或结合为铁蛋白储存于体内,研究还发明CO能保护肝脏移动物缺血再灌注伤害并延长其冷保存时光。器官在多种应豪情况下能引诱HO-1表白对组织器官起到保护作用,因此,HO-1对器官的缺血再灌注伤害有重要的抗炎性作用跟临床利用潜能。Kupffer细胞是位于肝血窦内的巨噬细胞,寄居于肝血窦内皮细胞之间或之上,是体内固定型巨噬细胞中最大的群体,约占肝细胞总数的10—15%、全身定居巨噬细胞总数的80%左右。在缺血再灌注早期,Kupffer细胞被激活,产生状况学改变并突向窦状隙内导致血流减少。激活的Kupffer细胞开释多种活性介质,如:炎性细胞因子,活性氧类物质等。Kupffer细胞在肝脏缺血再灌注伤害早期发挥侧重要的作用,有研究表明,克制Kupffer细胞的激活能改良肝脏缺血再灌注伤害,（文章此处忽略..）因为激活的Kupffer细胞会导致一系列的炎性介质、成长因子跟活性氧类物质的开释。通过单克隆抗体免疫组化成果发明HO-1重要分布在Kupffer细胞上,然而,HO-1在发挥保护肝脏冷缺血再灌注伤害时Kupffer细胞的发挥作用研究却很少。因此,本研究采取大鼠肝移植冷缺血再灌注模型,探讨HO-1保护肝脏缺血再灌注伤害与Kupffer细胞的作用,从而为HO-1保护缺血再灌注伤害作用的基本研究提供必定的实际基本跟实验根据。方法:1.采取大鼠肝脏离体Ⅳ型胶原酶灌注,剪碎肝脏,37℃消化30分钟,低速离心去除肝细胞,Percoll不持续密度梯度离心跟抉择性贴壁的方法分别Kupffer细胞,细胞按2×10~6/ml的密度用RPMI1640培养液接种于培养板内,通过墨汁吞噬实验跟ED2免疫细胞化学来鉴定Kupffer细胞。2.SPF级健康成年雄性SD大鼠,体重220～250g,被随机分为三组:①对比组:供肝不必任何药物处理;②锌原卟啉处理组:获取供肝24小时前腹腔打针HO-1克制剂锌原卟啉;③钴原卟啉处理组:获取供肝24小时前（本文此处忽略..）腹腔打针HO-1引诱剂钴原卟啉。供肝利用4℃生理盐水灌注并冷保存90min后移植给同基因SD大鼠,门静脉开放6小时后获取标本。分别并培养Kupffer细胞,培养48小时后收集上清,提取Kupffer细胞总mRNA或蛋白质。察看移植前肝脏HO-1的表白程度,检测血清ALT跟AST评估肝功能,组织病理察看肝细胞伤害程度,检测血浆跟培养上清促炎性细胞因子IL-6跟TNF-α的含量,通过RT-PCR跟Westernblot法测定Kupffer细胞CD14的表白程度。成果:1.分别的KCs的得率在细胞贴壁前2.1±0.3×10~6/g肝脏、贴壁后1.5±0.1×10~6/g肝脏,用0.4%台盼蓝染色,活率大于92%,ED2染色阳性的细胞达90%以上,分别的细胞培养后功能完全并延长呈不规矩型。2.获取大鼠供肝前利用锌原卟啉预处理后肝脏HO-1表白降落,钴原卟啉预处理后HO-1表白增加。钴原卟啉处理组大鼠血清转氨酶(ALT/AST)明显降落,而锌原卟啉处理组与对比组跟钴原卟啉组比拟增高。通过组织病理学察看发明锌原卟啉处理组肝细胞坏逝世重大、窦状隙充（文章此处忽略..）血肿胀,钴原卟啉处理组可见完全的肝小叶构造。检测血浆跟细胞培养上清细胞因子(IL-6/TNF-α)的含量,锌原卟啉组细胞因子的含量明显增高,而钴原卟啉组明显降落。锌原卟啉处理后培养的Kupffer细胞HO-1表白明显降落,CD14mRNA跟蛋白质程度表白上调,钴原卟啉处理后Kupffer细胞HO-1表白增高,CD14mRNA跟蛋白质程度表白下调。论断:1.本实验树破的大鼠肝脏Kupffer细胞的分别培养方法简便、高效、牢固,培养的细胞存在良好的生物学性状,为进一步研究提供基本。2.HO-1存在保护大鼠移植肝冷缺血再灌注伤害的作用,能减轻肝脏伤害,克制IL-6跟TNF-α的产生,改良肝功能,克制Kupffer细胞的激活可能是其作用机制之一。

以上为本篇毕业论文范文Kupffer细胞在血红素氧合酶-1保护大鼠移植肝缺血再灌注伤害中的的介绍部分。

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