逆转录病毒介导GW112基因在胃癌SGC-7901细胞中的表达研究

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逆转录病毒介导GW112基因在胃癌SGC-7901细胞中的表达研究

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毕业论文范文题目：逆转录病毒介导GW112基因在胃癌SGC-7901细胞中的表达研究，论文范文关键词：逆转录病毒介导GW112基因在胃癌SGC-7901细胞中的表达研究
逆转录病毒介导GW112基因在胃癌SGC-7901细胞中的表达研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：胃癌(GastricCancer,GC),目前第四大恶性肿瘤,是目前肿瘤死亡的第二位。尽管近年来在手术、放疗、化疗等方面已取得很大进展,但其疗效仍不容乐观,探索新的治疗方法因而显得十分迫切和必要。GW112,又名hGC-1,OLM4,hOlfD,属嗅觉介导素(olfactomedin)相关的糖蛋白,与其他基因较少同源,结构与功能所知甚少。其中以在胃癌的表达最为特异,属胃癌高特异性表达基因之一。最新研究表明GW112可向胞外分泌性表达,与细胞外黏附分子Lectins、Cadherin相互作用,有助于细胞黏附,据推测此特性与胃癌细胞的侵袭、转移相关。GW112还可促肿瘤细胞生长,拮抗干扰素β与RA联合诱导的细胞凋亡,并可与凋亡诱导分子GRIM-19发生蛋白间的相互作用（文章此处忽略..）并减弱其介导相关凋亡基因的表达。由于GW112在胃癌发生、发展的作用及抗*凋亡机制尚未明确,有必要对其功能做进一步解析。然而,目前很少有研究调查GW112基因表达在胃癌中的作用。有必要进一步研究GW112胃癌中的功能。本课题利用荧光定量PCR技术,分析GW112基因在胃癌组织、癌旁组织以及正常胃粘膜组织中的表达差异。其次,利用逆转录病毒载体pLEGFP-N1系统,构建人GW112基因增强型表达载体pLEGFP-N1-GW112,并将其包转出逆转录病毒,构建GW112基因在胃癌细胞稳定过表达的细胞模型,为深入了解GW112在胃癌中的作用及抗凋亡机制,奠定基础。本课题实验内容与结果包括以下几个方面:1、分析比较GW112基因在胃癌组织、癌旁组织以及正常胃粘膜组织中的表达差异。收集23例胃癌组织、癌旁（略..）组织以及正常胃粘膜组织,抽提总RNA,设计合成GW112与β-actin的特异引物,利用实时定量PCR分析三者间GW112基因的表达差异。结果显示:与癌旁组织以及正常胃粘膜组织相比,GW112基因在胃癌组织明显上调(3-6倍);而癌旁组织以及正常胃粘膜组织相比无较大差异(1.3倍);研究显示GW112基因在胃癌组织属过表达,与国外研究基本一致。2、建立GW112稳定过表达的SGC-7901细胞模型。构建pLEGFP-N1-GW112重组逆转录病毒载体,转染PT67包装细胞进行病毒包装。经G418筛选,建立稳定的产毒的PT67-GFP与PT67-GW112细胞。收集病毒经纯化感染SGC-7901细胞,再次经过G418筛选稳定筛选,建立起SGC-7901-GFP对照细胞以及GW112稳定过表达的SGC-7901-GW112细胞株。实时定量PCR用于分析GW112基因的（本文此处忽略..）表达。1)、PCR扩增携带信号肽序列的GW112基因,扩增产物经限制酶消化克隆入逆转录病毒载体pLEGFP-N1的SalI与BamHI位点间,构建pLEGFP-N1-GW112重组逆转录病毒载体。酶切与测序结果分析显示重组质粒构建正确,且GW112基因与基因库中NM.006418序列一致。2)、pLEGFP-N1-GW112与pLEGFP-N1对照经脂质体Lipofectamine2000.转染如PT67包装细胞,经G418筛选,获得稳定产毒株PT67-GFP及PT67-GW112。3)、裂解后产生的病毒感染SGC-7901细胞,再次经G418筛选,获得了SGC-7901-GFP与SGC-7901-GW112的稳定克隆。实时定量PCR检测稳定克隆间GW112基因表达水平。结果显示:逆转录病毒介导的GW112基因能稳定而持久的增强GW112基因在胃癌SGC-7901细胞中的表达。（此处忽略..）本实验是研究GW112基因在胃癌细胞中功能的前期工作。通过构建稳定高表达GW112的人胃癌细胞SGC7901细胞株,对进一步研究GW112基因表达对胃癌细胞的生物学行为及表型的影响,探索其分子机制,为侵袭性胃癌的早期诊断及治疗奠定良好的基础。

以上为本篇毕业论文范文逆转录病毒介导GW112基因在胃癌SGC-7901细胞中的表达研究的介绍部分。

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